人黑色素瘤抗原MAGE-3肿瘤疫苗的构建及其诱导HLA-A0201转基因小鼠CTL活性的观察

R739.5; 目的 通过基因工程的方法获得人黑色素瘤抗原MAGE-3的DNA和蛋白疫苗,并观察其对HLA-A*0201转基因小鼠的CTL活性的影响.方法 用RT-PCR的方法,从人黑色素瘤细胞株A375中扩增MAGE-3的cDNA片段,分别将其插入到pcDNA3.1/V5-His真核和pET32a原核表达载体.将pcDNA-MAGE-3转染B16肿瘤细胞观察其是否能在真核细胞中表达;将pET32a-MAGE-3转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE观察融合蛋白表达情况.并用镍柱亲和层析的方法纯化融合蛋白.然后,采用DNA疫苗初次免疫和蛋白疫苗加强的策略免疫HLA-A*0201...

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Published in肿瘤防治研究 Vol. 34; no. 10; pp. 739 - 742
Main Authors 宋淑霞, 刘贵然, 郑龙, 王俊霞, 刘福英
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 河北医科大学实验动物学部,石家庄,050017%河北医科大学数学教研室,石家庄,050017 2007
Subjects
CTL活性
肿瘤抗原MAGE-3
HLA-A0201转基因小鼠
真核/原核表达
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ISSN1000-8578
DOI10.3971/j.issn.1000-8578.2007.10.001

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Summary:R739.5; 目的 通过基因工程的方法获得人黑色素瘤抗原MAGE-3的DNA和蛋白疫苗,并观察其对HLA-A*0201转基因小鼠的CTL活性的影响.方法 用RT-PCR的方法,从人黑色素瘤细胞株A375中扩增MAGE-3的cDNA片段,分别将其插入到pcDNA3.1/V5-His真核和pET32a原核表达载体.将pcDNA-MAGE-3转染B16肿瘤细胞观察其是否能在真核细胞中表达;将pET32a-MAGE-3转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE观察融合蛋白表达情况.并用镍柱亲和层析的方法纯化融合蛋白.然后,采用DNA疫苗初次免疫和蛋白疫苗加强的策略免疫HLA-A*0201转基因小鼠,LDH方法检测CTL活性.结果 酶切结果证实,成功地构建了pcDNA-MAGE-3真核表达载体和pET32a-MAGE-3原核表达载体,并在真核细胞B16和原核细胞大肠杆菌中获稳定表达,原核表达产物为融合蛋白且分布于包涵体.用DNA疫苗进行初次免疫,镍柱纯化的融合蛋白加强免疫后,可成功地诱导HLA-A*0201转基因小鼠CTL活性.结论 成功地获得了MAGE-3肿瘤抗原,为进一步完善MAGE-3肿瘤疫苗打下了基础.
ISSN:1000-8578
DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2007.10.001