禽CD133胞外结构域原核表达及多克隆抗体的制备

Q786%S858.31; 为构建禽CD133胞外区原核表达载体,制备抗CD133多克隆抗体,在生物信息学分析的基础上,选取禽CD133蛋白N端胞外区一段由89个氨基酸残基构成的肽段作为候选抗原,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增其编码基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;目的蛋白经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗血清.结果表明,构建的原核表达载体可高效表达CD133重...

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Published in浙江大学学报（农业与生命科学版） Vol. 44; no. 6; pp. 743 - 747
Main Authors 章乔艳, 邵冯金, 俞向前, 谭勋
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 浙江大学动物科学学院,杭州,310058%浦东新区动物疫病预防控制中心,上海,201200 2018
Subjects
CD133蛋白
家禽
多克隆抗体
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Summary:Q786%S858.31; 为构建禽CD133胞外区原核表达载体,制备抗CD133多克隆抗体,在生物信息学分析的基础上,选取禽CD133蛋白N端胞外区一段由89个氨基酸残基构成的肽段作为候选抗原,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增其编码基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;目的蛋白经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗血清.结果表明,构建的原核表达载体可高效表达CD133重组蛋白.蛋白质印迹法(Western-blotting)证实鼠抗禽CD133血清可特异性识别CD133重组蛋白.免疫组化染色结果显示,该抗血清可用于检测组织中的CD133阳性细胞.上述结果表明,利用禽CD133蛋白N端胞外结构域重组蛋白为抗原成功制备出了抗禽CD133多克隆抗体.
ISSN:1008-9209
DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2017.08.152