靶向CD52嵌合抗原受体T细胞的制备及其抗白血病作用研究

• Published in: 中华血液学杂志 Vol. 43; no. 4; pp. 279 - 286
• Main Authors: 刘琰, 刘钰, 唐克晶, 陈兆琪, 牟峻黎, 徐颖茜, 邢海燕, 田征, 饶青, 王敏, 王建祥
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院（中国医学科学院血液学研究所），实验血液学国家重点实验室，国家血液系统疾病临床医学研究中心，细胞生态海河实验室，天津市血液病细胞治疗研究重点实验室，天津 300020 2022
• Subjects: CD52; Chimeric antigen receptor T cells; 免疫治疗; Immunotherapy; 嵌合抗原受体
• ISSN: 0253-2727
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2022.04.003

目的:构建一种靶向CD52的嵌合抗原受体T细胞（CD52 CAR-T），探索其对CD52 +白血病的治疗效果。 方法:应用分子克隆技术构建以CD52为抗原结合区的CD52 scFv、4-1BB为共刺激分子的二代CAR-T细胞。慢病毒载体包装后感染T细胞，制备CD52 CAR-T细胞，通过流式细胞术检测CD52 CAR-T细胞CD4、CD8细胞亚群及其分化状态。通过体外杀伤实验、脱颗粒实验及细胞因子的释放等功能实验，观察CD52 CAR-T细胞对CD52 +白血病细胞的特异性细胞毒作用。 结果:①成功构建了pCDH-CD52 scFv-CD8α-4-1BB-CD3ζ-GFP表达载体，感染人T细胞，获得靶向CD52的CAR-T细胞。②感染CD52 CAR表达载体的第6天，T细胞中表达CD52的细胞可被清除[CD52 CAR-T组CD52 + T细胞为（4.48±4.99）%，Vector-T组为（56.58±19.8）%， P=0.011]。③CD52 CAR-T的自我杀伤不会影响T细胞的增殖，培养后期CD52 CAR-T组的增殖速度高于Vector-T组。④T细胞表型检测发现CD52 CAR可以促进CAR-T细胞向中心记忆T细胞及效应记忆T细胞分化，减少CAR-T细胞向终末效应细胞分化。⑤CD52 CAR-T细胞与HuT78-19t及MOLT4-19t靶细胞以效靶比1∶1共培养24 h，HuT78-19t细胞可被清除，而对MOLT4-19t细胞无明显杀伤作用[（2.66±1.60）%对（56.66%±5.74）%， P<0.001]。⑥脱颗粒实验显示，HuT78-19t细胞对CD52 CAR-T细胞的激活作用显著高于MOLT4-19t细胞[（57.34±11.25）%对（13.06±4.23）%， P<0.001]。⑦CD52 CAR-T与HuT78-19t细胞共培养48 h上清中细胞因子分泌水平[IFN-γ（3706±226）pg/ml、TNF-α（1732±560）pg/ml]远高于MOLT4-19t细胞组[IFN-γ（1577±846）pg/ml、TNF-α（74±12）pg/ml]（ P值均<0.01）。 结论:该研究成功制备了具有抗白血病作用的CD52 CAR-T细胞，为进一步的靶向CD52的免疫治疗奠定了基础。