miRNA-196b-5p和miRNA-99a-5p对多发性骨髓瘤细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞miRNA-196b-5p和miRNA-99a-5p表达与自噬和凋亡的关系.方法 以人MM细胞株U266细胞及45例MM患者瘤细胞为研究对象,以40例健康体检者为对照,采用实时定量PCR法测定细胞中miRNA-196b-5p和miRNA-99a-5p表达水平,采用Western blot法测定自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、P62、Beclin-1)、凋亡相关分子(CL caspase3、CL caspase7、Bcl-2、Bax)和TGF-β/Smad通路相关蛋白(TGF-β1、Smad2/3、p-Smad3、Smad7)表达水平,采用流式细胞术测定细...

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Published in中华血液学杂志 Vol. 39; no. 9; pp. 766 - 772
Main Authors 尚晋, 陈志忠, 王志红, 魏天南, 吴文冰, 陈为民
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 福建医科大学省立临床医学院、福建省立医院血液科,福州,350001 2018
Subjects
细胞凋亡
自噬
多发性骨髓瘤
MicroRNAs
Multiple myeloma
Autophagy
微RNAs
Apoptosis
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Summary:目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞miRNA-196b-5p和miRNA-99a-5p表达与自噬和凋亡的关系.方法 以人MM细胞株U266细胞及45例MM患者瘤细胞为研究对象,以40例健康体检者为对照,采用实时定量PCR法测定细胞中miRNA-196b-5p和miRNA-99a-5p表达水平,采用Western blot法测定自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、P62、Beclin-1)、凋亡相关分子(CL caspase3、CL caspase7、Bcl-2、Bax)和TGF-β/Smad通路相关蛋白(TGF-β1、Smad2/3、p-Smad3、Smad7)表达水平,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,分析miRNA表达水平与MM患者临床特征的相关性.结果 ①与正常浆细胞比较,U266细胞、MM患者瘤细胞的miRNA-196b-5p表达显著增加(0.43±0.15对2.44±0.63、2.02±0.85,P值均＜ 0.001),miRNA-99a-5p表达显著降低(1.87±0.61对0.62±0.15、0.80±0.33,P值均＜0.001),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2表达显著增加,P62、Bax、CL caspase3、CL caspase7表达显著降低,细胞凋亡率降低(P值均＜ 0.05).②正常CD138+浆细胞分别转染miRNA-196b-5pmimic或miRNA-99a-5pinhibitor 48h后,与未转染对照组比较,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、TGF-β1、p-Smad3表达显著增高,P62、Smad7表达显著降低,细胞凋亡率减少(P值均＜0.05);上述反应体系加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤后,细胞凋亡率未见明显改变(P值均＞0.05).③miRNA-196b-5p和miRNA-99a-5p表达与MM患者DS分期(P值分别为0.004、0.012)、ISS分期显著相关(P值均为0.001).结论 miRNA-196b-5p和miRNA-99a-5p表达与MM患者临床特征密切相关,miRNA-196b-5p过表达和miRNA-99a-5p表达下调通过上调自噬水平抑制骨髓瘤细胞凋亡,其机制与活化TGF-β/Smad信号通路有关.
ISSN:0253-2727
DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2018.09.013