uPAR通过MAPK信号抑制细胞自噬促进胰腺癌增殖、侵袭及化疗抵抗的作用研究

R735.9; 背景与目的:尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)基因扩增与胰腺癌患者的不良预后密切相关.uPAR通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号转导通路调控胰腺癌细胞的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)和化疗抵抗,但具体机制尚未完全阐明.本研究旨在探讨uPAR通过抑制细胞自噬促进胰腺癌细胞增殖、侵袭和化疗抵抗的机制.方法:收集2021年12月—2022年6月在南华...

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Published in中国癌症杂志 Vol. 34; no. 10; pp. 944 - 956
Main Authors 谭小浪, 姚莎, 王桂华, 彭罗根
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 南华大学附属长沙中心医院肿瘤科,湖南 长沙,410004%中南大学湘雅三医院病理科,湖南 长沙,410001 2024
Subjects
自噬
Gemcitabine
胰腺癌
Pancreatic cancer
Chemoresistance
吉西他滨
化疗抵抗
Organoid
uPAR
类器官培养
Autophagy
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ISSN1007-3639
DOI10.19401/j.cnki.1007-3639.2024.10.004

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Summary:R735.9; 背景与目的:尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)基因扩增与胰腺癌患者的不良预后密切相关.uPAR通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号转导通路调控胰腺癌细胞的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)和化疗抵抗,但具体机制尚未完全阐明.本研究旨在探讨uPAR通过抑制细胞自噬促进胰腺癌细胞增殖、侵袭和化疗抵抗的机制.方法:收集2021年12月—2022年6月在南华大学附属长沙中心医院(长沙市中心医院)接受手术切除和穿刺活检患者的胰腺癌组织标本[获得长沙市中心医院医院伦理委员会批准,编号:2021-S0182,2022-S0084],体外培养胰腺癌患者来源类器官(patient-derived organoids,PDO);使用6种胰腺癌细胞系(AsPC-1、PANC-1、CAPAN-1、CAPAN-2、MIA PaCa-2和PaTu8988T),利用成簇规律间隔短回文重复序列及其关联核酸酶9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9,CRISPR/Cas9)技术构建uPAR缺陷模型.采用共聚焦显微镜、蛋白质印迹法(Western blot)、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和MTS实验测定细胞增殖、侵袭能力,并分析MAPK和自噬信号通路以及吉西他滨诱导的细胞死亡变化.采用RNA干扰(siRNA)或自噬抑制剂评估联合治疗的协同作用.结果:在AsPC-1细胞中,uPAR敲除后,MTS实验和损伤修复实验结果显示,与野生型细胞相比,克隆细胞的增殖和迁移能力显著降低,对吉西他滨的敏感性降低.uPAR重新表达后,克隆细胞的增殖和侵袭能力恢复,且对吉西他滨的敏感性部分恢复.共聚焦显微镜结果显示,克隆细胞的F-肌动蛋白减少,细胞变得圆滑.Western blot结果显示,与野生型细胞相比,克隆细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和Slug表达升高,波形蛋白(vimentin)表达降低;磷酸化-黏着斑
ISSN:1007-3639
DOI:10.19401/j.cnki.1007-3639.2024.10.004