陆地棉叶片特异性表达启动子的克隆与表达分析

Q786; [目的]本研究旨在获得叶片特异表达启动子的全长并进行表达分析,为抗逆转基因育种提供重要顺式作用元件.[方法]通过基因芯片及RT-PCR筛选鉴定出1个高活性的棉花叶片特异性表达基因,通过电子克隆及PCR获得了该基因全长,并通过染色体步移法(Genome walking)经过3次步移成功获得翻译起始位点上游2kb左右的DNA片段,将其命名为叶片特异性表达启动子LSP(leaf specific promoter).[结果]生物信息学分析表明,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CAAT-box及多个顺势作用元件.通过构建该启动子驱动GUS的植物表达载体pGhlsp∷GUS,并经...

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Published in西南农业学报 Vol. 31; no. 4; pp. 646 - 652
Main Authors 司爱君, 杨维才, 谢宗铭, 田琴, 董永梅, 李有忠, 马盼盼
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 新疆农垦科学院棉花研究所/农业部西北内陆区棉花生物学与遗传育种重点实验室/新疆兵团棉花遗传改良与高产栽培重点实验室,新疆 石河子,832000%中国科学院遗传发育学研究所,北京,100101%新疆农垦科学院生物技术研究所,新疆 石河子,832000 2018
Subjects
Promoter
Expression characteristic
启动子
棉花
Tissue specificity
Cotton
组织特异性
表达特性
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Summary:Q786; [目的]本研究旨在获得叶片特异表达启动子的全长并进行表达分析,为抗逆转基因育种提供重要顺式作用元件.[方法]通过基因芯片及RT-PCR筛选鉴定出1个高活性的棉花叶片特异性表达基因,通过电子克隆及PCR获得了该基因全长,并通过染色体步移法(Genome walking)经过3次步移成功获得翻译起始位点上游2kb左右的DNA片段,将其命名为叶片特异性表达启动子LSP(leaf specific promoter).[结果]生物信息学分析表明,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CAAT-box及多个顺势作用元件.通过构建该启动子驱动GUS的植物表达载体pGhlsp∷GUS,并经农杆菌花絮侵染法转化拟南芥,对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色观察,结果显示该基因主要在叶片中特异性表达,而根部以及茎部几乎不表达.[结论]LSP是一个全新的叶片特异性表达启动子,为研究外源基因在棉花叶片中的定位表达奠定基础.基因工程中利用此类启动子可以在改良棉花性状的同时减少对棉花生理方面的副作用,在棉花抗逆转基因育种方面有广泛的应用前景.
ISSN:1001-4829
DOI:10.16213/j.cnki.scjas.2018.4.002