IHHNV编码蛋白酵母双杂交诱饵载体的建及自激活研究

S945.1; 应用酵母双杂交体系,构建凡纳滨对虾IHHNV 3个开放阅读框的酵母双杂交诱饵载体,并对该载体的表达产物对酵母细胞的毒性及其对报告基因的自激活作用进行检测,为运用酵母双杂交文库筛选与病毒互相作用的蛋白提供参考.对凡纳滨对虾IHHNV病毒3个开放阅读框的基因片段进行PCR特异性扩增,并运用In-Fusion技术将该基因片段与双酶切的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7进行连接,获得重组质粒pGBKT7-CP、pGBKT7-NS1和pGBKT7-NS2,并进行自激活和毒性检测.结果表明,pGBKT7-CP、pGBKT7-NS1和pGBKT7-NS2等3个重组质粒对MEL1报告基因无自激活性...

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Published in西南农业学报 Vol. 29; no. 8; pp. 2004 - 2008
Main Authors 彭敏, 苏绍萍, 陈秀荔, 杨春玲, 朱威霖, 王建平, 曾地刚, 李咏梅, 赵永贞
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 广西大学动物科学技术学院,广西南宁530005%宁波市海洋与渔业研究院,浙江宁波,315010 2016
广西壮族自治区水产科学研究院,广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室,广西南宁 530021%广西壮族自治区水产科学研究院,广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室,广西南宁 530021
Subjects
Litopenaeusvannamei
IHHNV
Self activation
自激活作用
凡纳滨对虾
酵母双杂交
Yeast two hybrid system
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ISSN1001-4829
DOI10.16213/j.cnki.scjas.2016.08.046

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Summary:S945.1; 应用酵母双杂交体系,构建凡纳滨对虾IHHNV 3个开放阅读框的酵母双杂交诱饵载体,并对该载体的表达产物对酵母细胞的毒性及其对报告基因的自激活作用进行检测,为运用酵母双杂交文库筛选与病毒互相作用的蛋白提供参考.对凡纳滨对虾IHHNV病毒3个开放阅读框的基因片段进行PCR特异性扩增,并运用In-Fusion技术将该基因片段与双酶切的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7进行连接,获得重组质粒pGBKT7-CP、pGBKT7-NS1和pGBKT7-NS2,并进行自激活和毒性检测.结果表明,pGBKT7-CP、pGBKT7-NS1和pGBKT7-NS2等3个重组质粒对MEL1报告基因无自激活性;对AUR1-C报告基因无自激活作用,pGBKT7-CP,pGBKT7-NS1,pGBKT7-NS2和空载体的酵母菌在SD/-Trp液体培养基中培养16 h后,菌液的OD600均大干0.8,说明诱饵载体无毒性且不具自主激活报告基因的功能,所获得的无自激活作用的诱饵载体可用于酵母双杂交试验.
ISSN:1001-4829
DOI:10.16213/j.cnki.scjas.2016.08.046