小鼠胚胎脊髓神经干细胞提取与传代培养:3种常用消化酶优劣的比较与分析

R459.9%R338.1%R744; 背景:在神经干细胞的研究及应用过程中,细胞的培养与传代是关键环节,直接影响到细胞的质量和实验结果.寻找一种最适宜的消化酶类,对维持胚胎小鼠脊髓神经干细胞的生物学特性并增强其传代效率,具有重要意义. 目的:探讨胚胎小鼠脊髓神经干细胞传代最适合的消化酶. 方法:显微解剖分离提取孕14 d C57BL/6胎鼠脊髓组织,用含有表皮生长因子、碱性成纤维生长因子及B27的DMEM/F12无血清培养基培养,待成球后进行Nestin与Sox2免疫荧光鉴定.神经干细胞传代培养过程中分别采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶以及TrypLETM Express酶消化结合吹打法制成单细胞悬...

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Published in中国组织工程研究 Vol. 29; no. 31; pp. 6609 - 6615
Main Authors 罗丹, 葛志林, 侯永辉, 王万舜, 詹吉恒, 侯宇, 林定坤, 陈树东
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 广州中医药大学第二附属医院,广东省 广州市 510000 2025
广东省中医药科学院,广东省 广州市 510000%广州中医药大学第二附属医院,广东省 广州市 510000
广州中医药大学,广东省 广州市 510000
Subjects
木瓜蛋白酶
neural stem cell
胚胎
神经干细胞
TrypLETM Express酶
工程化干细胞
C57BL/6小鼠
embryo
engineered stem cell
papain
TrypLETM Express enzyme
C57BL/6 mouse
胰蛋白酶
脊髓
trypsin
spinal cord
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Summary:R459.9%R338.1%R744; 背景:在神经干细胞的研究及应用过程中,细胞的培养与传代是关键环节,直接影响到细胞的质量和实验结果.寻找一种最适宜的消化酶类,对维持胚胎小鼠脊髓神经干细胞的生物学特性并增强其传代效率,具有重要意义. 目的:探讨胚胎小鼠脊髓神经干细胞传代最适合的消化酶. 方法:显微解剖分离提取孕14 d C57BL/6胎鼠脊髓组织,用含有表皮生长因子、碱性成纤维生长因子及B27的DMEM/F12无血清培养基培养,待成球后进行Nestin与Sox2免疫荧光鉴定.神经干细胞传代培养过程中分别采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶以及TrypLETM Express酶消化结合吹打法制成单细胞悬液,观察细胞分散效果及成球情况,取第3代细胞进行碘化丙啶染色观察细胞死亡情况,通过计数细胞总数观察细胞增殖情况,通过免疫荧光染色、Western blot和RT-PCR检测Olig2、Tuj1、GFAP、NeuN蛋白和mRNA表达鉴定细胞分化情况. 结果与结论:脊髓组织细胞培养72 h后可形成悬浮生长的神经球,5-7 d后即可传代.与胰蛋白酶、木瓜蛋白酶相比,TrypLETM Express酶结合吹打法进行传代的细胞分散率高,活性较好,分化为NeuN与Tuj1的阳性神经元细胞较多.此研究优化了神经干细胞的培养和传代过程,为进一步开展脊髓疾病的干细胞移植治疗研究奠定了基础.
ISSN:2095-4344
DOI:10.12307/2025.540