无血清和有血清培养人脐带间充质干细胞的对比

• Published in: 中国组织工程研究 Vol. 22; no. 13; pp. 2020 - 2026
• Main Authors: 张学娟, 刘高米洋, 刘菊芬, 宋乙甲, 林庆铿, 白盈盈, 潘兴华
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 昆明医科大学解放军昆明总医院临床学院,云南省昆明市 650032 2018; 解放军昆明总医院细胞生物治疗中心,干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室,云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室,云南省昆明市 650032%解放军昆明总医院细胞生物治疗中心,干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室,云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室,云南省昆明市 650032
• Subjects: 脐带间充质干细胞; 血清替代物; 外泌体; 干细胞; 胎牛血清
• ISSN: 2095-4344
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0496

R394.2; 背景:研究表明有血清培养体系存在若干风险和问题,比如免疫排斥、批次差异、病毒风险等,另外随着外泌体的发现和应用,无血清培养体系变得越来越重要.目的:系统比较人脐带间充质干细胞无血清培养体系与传统有血清培养体系的异同,为人脐带间充质干细胞的临床转化奠定基础和提供实验数据.方法:无菌条件下采集健康剖腹产足月儿脐带,组织块贴壁法培养人脐带间充质干细胞,从第1代开始有血清培养组用体积分数为10%胎牛血清培养,血清替代物组用体积分数为15%血清替代物培养.倒置显微镜观察其形态变化,流式细胞仪检测其表面标记物,CCK-8检测其增殖能力,诱导分化实验检测其多向分化潜能, Western Blot检测干性标志物oct4、nanog、sox2的蛋白水平.结果与结论:①倒置显微镜下观察可见血清替代物组人脐带间充质干细胞呈现较均一的漩涡状生长,胎牛血清组人脐带间充质干细胞随着细胞代数的增加逐渐出现细胞分化或者老化现象;②两种培养法培养的人脐带间充质干细胞均表达CD73,CD90和CD105,低表达CD34和CD45,二者无明显差异;③增殖能力上胎牛血清组优于血清替代物组;④两种培养法培养的人脐带间充质干细胞均具有成脂、成骨、成软骨诱导分化能力,二者无明显差异;⑤血清替代物组与胎牛血清组oct4、nanog的表达水平无显著差异,血清替代物组sox2表达水平高于胎牛血清组(P < 0.05);⑥血清替代物培养的人脐带间充质干细胞符合间充质干细胞国际标准,血清替代物能够替代胎牛血清成为培养人脐带间充质干细胞的优选方法.