人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较

• Published in: 中国组织工程研究 Vol. 22; no. 9; pp. 1382 - 1388
• Main Authors: 郭莹, 王秀伟, 牛玉虎, 王莉, 周楠, 李佰一, 王振东, 张蘋, 高亚杰, 牛勃
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 山西医科大学基础医学院,山西省太原市,030001%首都儿科研究所,北京市,100020%山西医科大学,生物化学与分子生物学教研室,山西省太原市030001%山西医科大学,解剖教研室,山西省太原市030001 2018
• Subjects: 提取方法; 外泌体; "无细胞"替代疗法; 人脐带间充质干细胞; 干细胞; 国家自然科学基金; 培养基; 差速超速离心法; Total Exosome Isolation试剂盒法; Exo Quic-TC试剂盒法; 干细胞治疗
• ISSN: 2095-4344
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0468

R394.2; 背景:近年来"无细胞"的干细胞治疗方法备受关注,但对于提取高质量外泌体的方法尚无确切定论.目的:采用3种方法提取人脐带间充质干细胞中的外泌体,筛选最佳提取外泌体的方法.方法:分别用Total Exosome Isolation试剂盒、Exo Quick试剂盒及差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞来源的外泌体.使用透射电镜观察外泌体形态,BCA法进行蛋白质定量,western blot检测外泌体表面标志物CD9、CD81、CD63的表达.结果与结论:①3种方法均可以从培养基中提取到间充质干细胞来源的外泌体,并且在透射电镜下观察到圆形或椭圆形的膜性小囊泡;②差速超速离心法提取的外泌体中的蛋白浓度和纯度最高,Exo Quick 试剂盒法其次,Total Exosome Isolation试剂盒法得到的蛋白浓度最低,且3者比较差异有显著性意义(P < 0.05);③3种方法提取的外泌体均表达其表面特异性标志物 CD81、CD63和CD9,且在含有相同蛋白浓度的情况下,差速超速离心法提取的外泌体的表面标志物含量最高,Exo Quick 试剂盒法其次,Total Exosome Isolation试剂盒法提取的外泌体表面标志物含量较低;④差速超速离心法和Total Exosome Isolation试剂盒法的操作时间明显多于Exo Quick试剂盒法,差异有显著性意义(P < 0.05);⑤结果表明,尽管差速超速离心法耗时稍长,但是纯度相对较高,满足实验的基本需求,可作为一种合理的分离方法.