水产品和水体中创伤弧菌现场可视化环介导恒温扩增快检方法的建立及应用

目的 基于环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立水产品和养殖水域中创伤弧菌的现场可视化快速检测方法.方法 以创伤弧菌作为研究对象,分别采用煮沸法和离心柱法提取基因组DNA,优化弧菌DNA提取方法;以创伤弧菌gyrB基因作为靶基因,设计筛选最佳的适于LAMP的引物序列,分别通过LAMP荧光扩增曲线(加SYTO-9荧光染料),以及LAMP可视化观察扩增产物的颜色变化(加钙黄绿素),开展特异性、灵敏度和重复性实验分析.结果 煮沸法为适合于弧菌基因组DNA提取的快捷方法;优化筛选的引物可以特异地检测创伤弧菌,检测核酸浓度的灵敏度...

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Published in食品安全质量检测学报 Vol. 12; no. 22; pp. 8782 - 8789
Main Authors 田卓, 杨莉莉, 郑秋月, 麻利丹, 刘圣聪, 尚德静, 曹际娟
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 辽宁师范大学生命科学学院, 大连 116033 2021
大连民族大学, 生物技术与资源利用教育部重点实验室, 大连 116600
大连海关技术中心双D港实验室, 大连 116000%大连民族大学, 生物技术与资源利用教育部重点实验室, 大连 116600%丹东海关综合技术服务中心,丹东 118000%大连天正实业有限公司, 大连 116000%辽宁师范大学生命科学学院, 大连 116033
Subjects
创伤弧菌;水产品;水体;可视化;环介导恒温扩增技术
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Summary:目的 基于环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立水产品和养殖水域中创伤弧菌的现场可视化快速检测方法.方法 以创伤弧菌作为研究对象,分别采用煮沸法和离心柱法提取基因组DNA,优化弧菌DNA提取方法;以创伤弧菌gyrB基因作为靶基因,设计筛选最佳的适于LAMP的引物序列,分别通过LAMP荧光扩增曲线(加SYTO-9荧光染料),以及LAMP可视化观察扩增产物的颜色变化(加钙黄绿素),开展特异性、灵敏度和重复性实验分析.结果 煮沸法为适合于弧菌基因组DNA提取的快捷方法;优化筛选的引物可以特异地检测创伤弧菌,检测核酸浓度的灵敏度可以达到10 fg/μL,并且结果稳定、可靠.采用该方法进行实际样品的检测应用,在558份水体样品和655份水产品样品中,创伤弧菌阳性检出率分别为9.01％和8.60％,阳性检出率明显高于传统的分离培养鉴定结果.结论 低技术要求、低设备成本及检测时间短使得可视化LAMP快检方法成为现场可使用的一个理想选择,对于水产养殖业来说也更方便.
ISSN:2095-0381