Th17细胞功能相关基因OX40L筛选及其与miR-146a-3p靶向关系验证、对Th17细胞迁移调控作用机制探讨

R744.51; 目的 筛选Th17细胞功能相关基因OX40L,验证其与微小核糖核酸146a-3p(miR-146a-3p)的靶向关系,并探讨其对Th17 细胞迁移的调控作用机制.方法 ①通过在GEO数据集中搜索multiple sclerosis,筛选出GSE57098基因数据集,R语言获取CD4+T细胞和Th17细胞的差异基因,DAVID 6.8在线分析软件获取GO分析及KEGG分析,STRING在线分析网站获取蛋白互作关系,Cytoscape软件获取Th17细胞功能相关的Hub蛋白,选取关键蛋白OX40L,并用qPCR进行验证.②使用Starbase预测miR-146a-3p与OX40L...

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Published in山东医药 Vol. 64; no. 36; pp. 29 - 39
Main Authors 黄韵, 李春美, 李作孝
Format Magazine Article
LanguageChinese
Published 西南医科大学附属医院神经内科,四川泸州 646000 2024
Subjects
多发性硬化
微小核糖核酸146a-3p
TNF-α途径
Th17细胞
OX40L gene
multiple sclerosis
miR-146a-3p
OX40L基因
TNF pathway
Th17 cells
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ISSN1002-266X
DOI10.3969/j.issn.1002-266X.2024.36.006

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Summary:R744.51; 目的 筛选Th17细胞功能相关基因OX40L,验证其与微小核糖核酸146a-3p(miR-146a-3p)的靶向关系,并探讨其对Th17 细胞迁移的调控作用机制.方法 ①通过在GEO数据集中搜索multiple sclerosis,筛选出GSE57098基因数据集,R语言获取CD4+T细胞和Th17细胞的差异基因,DAVID 6.8在线分析软件获取GO分析及KEGG分析,STRING在线分析网站获取蛋白互作关系,Cytoscape软件获取Th17细胞功能相关的Hub蛋白,选取关键蛋白OX40L,并用qPCR进行验证.②使用Starbase预测miR-146a-3p与OX40L存在结合位点,双荧光素酶报告实验验证miR-146a-3p与OX40L靶向关系.③体外培养生长良好的Th17细胞,给予miR-146a-3p模拟物和抑制剂及其对照处理,qRT-PCR检测Th17细胞miR-146a-3p mRNA,CCK8增殖实验检测各组Th17细胞增殖情况,Transwell小室侵袭实验检测各组Th17细胞迁移情况,流式细胞术检测各组Th17细胞凋亡比例;qRT-PCR法和Western blot法检测各组OX40L mRNA和蛋白,ELISA法检测各组Th17细胞TNF-α.结果 ①GSE57098数据集中Th17细胞和CD4+T细胞有差异基因2 130个,其中表达上调1 515个,表达下调615个,OX40L在表达上调的蛋白中排名靠前.OX40L在KEGG分析中参与Cytokine-cytokine receptor interaction途径.②miR-146a-3p与OX40L mRNA3'UTR呈靶向结合关系,miR-146a-3p可抑制OX40L基因的转录表达.③与对照组比较,miR-146a-3p mimic组Th17细胞TLR4和p-NFκB p65蛋白表达降低,分泌TNF-α能力降低,细胞迁移能力降低,P均<0.05.结论 OX40L在Th17细胞基因表达谱发生明显变化,其表达上调是造成多发性硬化发病的机制之一;miR-146a-3p通过靶向调节OX40L的表达,进一步抑制TNF-α途径中NF-κB p65的翻译水平,降低Th17细胞的迁移.
ISSN:1002-266X
DOI:10.3969/j.issn.1002-266X.2024.36.006