微炎症环境中肠上皮细胞与巨噬细胞共培养后MAPK、NF-κB通路改变及意义

• Published in: 山东医药 Vol. 61; no. 23; pp. 18 - 23
• Main Authors: 陈玉娇, 晏杰
• Format: Magazine Article
• Language: Chinese
• Published: 广州医科大学附属第二医院过敏反应与免疫重点实验室%广州医科大学附属第二医院过敏反应与免疫重点实验室 2021; 连云港市第二人民医院检验科,江苏连云港222023
• Subjects: MAPK通路; 巨噬细胞; 肠上皮细胞; NF-κB通路; 免疫耐受; Transwell共培养
• ISSN: 1002-266X
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2021.23.005

R574.4; 目的 观察微炎症环境中肠上皮细胞与巨噬细胞共培养后MAPK、NF-κB通路改变,探究固有免疫系统维持肠道免疫平衡的细胞间交流机制.方法 将人结肠腺癌上皮细胞株Caco2、HCA7分别与人白血病单核巨噬细胞株THP1构建Transwell小室共培养体系,加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)5 ng/mL刺激不同时间后,采用Western blotting法检测三种细胞单独及共培养后的MAPK通路[磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)]及NF-κB通路[磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、磷酸化核蛋白(p-p65)]相关蛋白表达.将对数生长期的THP1细胞分为Caco2培养基组和DMEM培养基组,离心后分别重悬于Caco2条件培养基和DMEM完全培养基,加入TNF-α5 ng/mL刺激不同时间后,采用Western blotting法检测细胞p-ERK、p-p38、p-IκBα、p-p65蛋白表达,采用RT-PCR法检测细胞TNF-α相关细胞因子[白细胞介素(IL)-8、IL-6、IL-1β]和CC亚族趋化性细胞因子2(CCL2)、CCL3 mRNA表达.结果 在单独培养的细胞中,Caco2细胞在TNF-α刺激30 min后p-ERK、p-p38、p-p65表达均升高,THP1细胞在TNF-α刺激90 min后p-p38、p-IκBα、p-p65表达均升高(P均<0.05);与单独培养细胞TNF-α刺激相同时间比较,共培养后的Caco2细胞在TNF-α刺激90 min后p-ERK、p-p38、p-IκBα表达均降低(P均<0.05),共培养后的THP1细胞在TNF-α刺激90 min后p-ERK、p-p38、p-IκBα、p-p65表达均降低(P均<0.05).在单独培养的细胞中,HCA7细胞在TNF-α刺激120 min后p-ERK、p-p38、p-IκBα、p-p65表达均升高,THP1细胞在TNF-α刺激30、120 min后p-ERK、p-p38、p-p65表达均升高(P均<0.05);与单独培养细胞TNF-α刺激相同时间比较,共培养后的HCA7细胞在TNF-α刺激120 min后p-ERK、p-IκBα、p-p65表达均降低,共培养后的THP1细胞在TNF-α刺激30、120 min后p-ERK、p-p38、p-p65表达均降低(P均<0.05)