非洲猪瘟病毒MGF505-5R基因分子特征及蛋白表达载体构建

S813.1; 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种对猪(Sus scrofa)具有毁灭性的疾病,通常引发出血热,对养猪业危害巨大.多基因家族(multigene families,MGF)505-5R位于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)基因组右侧可变区域(the right variable region,RVR),能够影响病毒的毒力.本研究旨在分析MGF505-5R基因和蛋白的分子特征,构建MGF505-5R基因真核表达载体.根据ASFV参考基因组(GenBank No.MK128995.1)提取MGF505-5R基因...

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Published in农业生物技术学报 Vol. 31; no. 5; pp. 1100 - 1110
Main Authors 沈兆基, 谢春嫡, 沙嘎那日·吉日木图, 郭肖蓉, 周荣, 李奎
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 佛山科学技术学院,生命科学与工程学院/广东省动物分子设计与精准育种重点实验室,佛山528225%中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193 2023
Subjects
蛋白结构
非洲猪瘟病毒
猪
真核表达载体
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Summary:S813.1; 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种对猪(Sus scrofa)具有毁灭性的疾病,通常引发出血热,对养猪业危害巨大.多基因家族(multigene families,MGF)505-5R位于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)基因组右侧可变区域(the right variable region,RVR),能够影响病毒的毒力.本研究旨在分析MGF505-5R基因和蛋白的分子特征,构建MGF505-5R基因真核表达载体.根据ASFV参考基因组(GenBank No.MK128995.1)提取MGF505-5R基因序列进行生物信息学分析,并合成MGF505-5R基因片段.通过同源重组的方式将MGF505-5R基因连接至pRK5M-C-2×Strep载体.经PCR和测序鉴定后,将重组质粒pRK5M-C-2×Strep-MGF505-5R转染至猪小肠上皮细胞系(porcine intestinal columnar epithelial cells,IPEC-J2)中,通过免疫荧光和Western blot检测MGF505-5R的基因表达效果.通过qPCR检测过表达pRK5M-C-2×Strep-MGF505-5R的IPEC-J2细胞中外切体(exosome)8个亚基、Mtr4外切体RNA解旋酶(Mtr4 exosome RNA helicase,MTREX)、末端核苷酸转移酶4A(terminal nucleotidyltransferase 4A,TENT4A)、锌指DHHC型棕榈酰转移酶16(zinc finger DHHC-type palmitoyltransferase 16,ZDHHC16)基因的表达.生物信息学分析结果表明,MGF505-5R基因在系统发育树中分为3个分支,MGF505-5R蛋白在20、105和485位氨基酸存在正向选择.MGF505-5R蛋白的二级结构与三级结构相符,正选择位点均位于无规则卷曲上.PCR结果显示MGF505-5R基因片段成功连接至pRK5M-C-2×Strep载体中.免疫荧光和Western blot检测结果显示,MGF505-5R蛋白能够在猪IPEC-J2细胞中表达.qPCR结果显示,过表达pRK5M-C-2×Strep-MGF505-5R的IPEC-J2细胞中外切体组分(exosome
ISSN:1674-7968
DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.05.019