鸡Rab5a与恒定链的结合特性及其在真核细胞的共定位研究

• Published in: 农业生物技术学报 Vol. 28; no. 6; pp. 74 - 82
• Main Authors: 谭红黎, 桂亚萍, 李梅珍, 黄鑫, 秦文娟, 查丽莎, 陈芳芳
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 安徽农业大学动物分子与应用免疫创新团队,合肥,230036 2020
• Subjects: Ii转运; 细胞器定位; 细胞内吞体; Rab5a
• ISSN: 1674-7968
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.06.008

S852.4; Rab5a是胞内转运蛋白,而恒定链(invariant chain,Ii)则是协助主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ分子装配成熟以及递呈抗原肽的免疫分子.长期以来,Ii的胞内途径机制并不清楚.本研究旨在探明鸡(Gallus gallus)Rab5a的结构特征及参与Ii在胞内转运中的作用.首先,用自行设计的引物克隆鸡Rab5a基因(GenBank No.XM_015281490),构建含鸡cIi、cIi突变体(IiD81-87aa和IiD91-99aa)的重组表达载体;其次,应用软件比对鸡和小鼠(Mus musculus)Rab5a蛋白质结构.最后,分别将Rab5a和cIi转染小鼠树突状细胞系DC2.4细胞,应用免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察鸡Rab5a与cIi和cIiD81-87aa和cIiD91-99aa在真核细胞内的定位与共定位.应用GST pull-down和Western blot检测鸡Rab5a和Ii蛋白分子间的相互作用.结果表明,克隆获得的鸡Rab5a基因与预期大小一致,为648 bp.分子结构分析表明,鸡与小鼠的Rab5a高度相似,同源性高达95.4％.同源建模分析结果显示,鸡与小鼠Rab5a均含有5个α螺旋和6个β折叠区,表明哺乳类和禽类Rab5a是同源的.激光共聚焦显微镜观察表明,鸡Rab5a和Ii均定位于细胞的早期内吞体,而突变体IiD81-87aa和IiD91-99aa却不能定位于早期内吞体.GST pull-down和Western blot结果显示鸡Rab5a能够结合Ii分子.综上所述,鸡Rab5a与Ii在早期内吞体的共定位和互相结合提示,Rab5a参与Ii在细胞内的转运.本结果为进一步研究其机理提供了新依据.