植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros的构建及其在草莓上的验证

为了研究多基因互作,减少多次转化的不确定性,本研究在花青素合成调节基因del(delila)和ros(rosea1)的上下游分别引入CaMV 35S启动子和rnos终止子,以pBI121-del和pCAMBIA 1301-ros做中间载体,并利用BamH Ⅰ和BglⅡ产生相同4碱基末端的片段,在连接酶的作用下将CaMV 35S启动子分别驱动的del和ros基因构建在同一个植物表达载体pCAMBIA2301上,利用所构建的载体pCAMBIA2301-del-ros通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) LBA4404介导的方法转化草莓(Fragaria ananas...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Published in农业生物技术学报 Vol. 22; no. 3; pp. 389 - 396
Main Authors 金万梅, 王华
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 北京市农林科学院林业果树研究所,北京,100093 2014
Subjects
Construction
Genetic transformation
Strawberry
转基因
构建
草莓
Plant expression vector
植物表达载体
Online AccessGet full text

Cover

More Information
Summary:为了研究多基因互作,减少多次转化的不确定性,本研究在花青素合成调节基因del(delila)和ros(rosea1)的上下游分别引入CaMV 35S启动子和rnos终止子,以pBI121-del和pCAMBIA 1301-ros做中间载体,并利用BamH Ⅰ和BglⅡ产生相同4碱基末端的片段,在连接酶的作用下将CaMV 35S启动子分别驱动的del和ros基因构建在同一个植物表达载体pCAMBIA2301上,利用所构建的载体pCAMBIA2301-del-ros通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) LBA4404介导的方法转化草莓(Fragaria ananassa Duch.),并进行PCR检测,获得转基因草莓.通过组织观察发现,转基因草莓的根和叶的颜色变成红紫色;实时RT-PCR分析表明,在转基因草莓中花青素合成的结构基因花色素合成酶(anthocyanidinsynthase,ANS)、查尔酮异构酶(chalcone-flavanone isomerase,CHI)、查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)、二羟黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR)、黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H和类黄酮-3-O-葡糖基转移酶(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase,UFGT)在转基因株系中的表达均上调,这也进一步证实通过该方法构建的植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros可以用来转化植物.本研究结果表明,植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros成功构建,为多基因植物表达载体的构建提供了一种思路,也为在植物体内同时研究多个基因的互作提供借鉴.
ISSN:1674-7968
DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2014.03.015