鹅myf6基因的克隆,胚胎期以及填饲后表达特征分析

• Published in: 农业生物技术学报 Vol. 22; no. 2; pp. 158 - 167
• Main Authors: 邵芳, 张燕萍, 王星果, 唐瑞璟, 龚道清, 顾志良
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 常熟理工学院生物与食品工程学院,常熟,215500%常熟理工学院生物与食品工程学院,常熟215500 2014; 扬州大学动物科技学院 扬州225009%扬州大学动物科技学院 扬州225009
• Subjects: Embryonic stage; 组织表达分析; 鹅; Goose; Overfeeding; 胚胎期; Tissue expressional pattern; 填饲; myf6
• ISSN: 1674-7968
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.02.004

myf6基因属于MyoD家族成员之一,为成肌细胞分化成肌管的重要调控因子.本研究旨在克隆鹅(Anser anser)myf6基因,并进一步探讨该基因的结构与功能,揭示其在胚胎期和填饲后的表达特征.以鹅肌肉总RNA为模板,采用RACE的方法,克隆该基因全长cDNA序列,并进行生物信息学分析.运用实时荧光定量PCR检测myf6基因在鹅不同胚胎期mRNA的表达规律,以及填饲对其表达的影响.鹅myf6全长cDNA为1 196 bp,包括90 bp的5'UTR,383 bp的3'UTR和723 bp的开放阅读框(ORF),共编码240个氨基酸(GenBank登录号:JQ905627).经预测鹅myf6编码蛋白的分子量为26 214.4,等电点为5.68,平均亲水性为-0.595,为不稳定亲水蛋白.预测鹅myf6蛋白具有Basic和HLH这两个明显的结构域,bHLH蛋白结构域形成剪刀状α-螺旋二聚体,且不同物种间HLH氨基酸序列高度同源.鹅myf6基因CDS区序列与鸭(Anas platyrhynchos)同源性最高,为98.62％,与哺乳类同源性在81％左右,与鱼类同源性较低,仅62％～66％.构建的系统进化树显示,所有哺乳类、鸟类、硬骨鱼各形成一个大的分支,两栖类形成独立分支,鹅首先与绿头鸭(Anas platyrhynchos)聚成一支,分子进化地位上关系最近,其次聚类顺序较近的物种为红原鸡(Gallus gallus),该结果与这些物种在生物学上的分类是较一致的.荧光定量PCR结果显示,鹅myf6 mRNA在胚胎早期第7天就有少量的表达,7天以后表达量逐渐上升,随后在胚胎中期表达量明显升高;其在E18肌肉组织中表达量达到高峰后下降,胚胎发育后期E21myf6 mRNA的表达量是E25的近4倍,E25后逐渐趋于平稳;E18与E14、E15、E25和E28的表达差异极显著(P＜0.01),E21与E25、E28的表达也差异极显著(P＜0.01),与E14、E15的表达差异显著(P＜0.05).在鹅的胸肌和腿肌组织中,填饲组mnyf6 mRNA表达量高于对照组中该基因的表达量,且胸肌组织达到显著水平(P＜0.05).鹅myf6基因的表达具有组织特异性,该结果为进一步研究生肌调节因子myf6基因结构及其在鹅胚胎期肌肉发育中的作用提供了理论基础.