诱导表达猪生长激素pGH载体系统构建及其在PK15细胞中表达验证

• Published in: 农业生物技术学报 Vol. 21; no. 4; pp. 483 - 488
• Main Authors: 白立景, 周荣, 敖红, 鞠辉明, 王楚端, 李奎
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193 2013; 中国农业大学动物科技学院,北京100193%中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193%扬州大学兽医学院,扬州,225009%中国农业大学动物科技学院,北京,100193
• Subjects: 四环素(TET-ON); 诱导表达; 猪生长激素(pGH)
• ISSN: 1674-7968
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.04.014

为实现外源生长激素(GH)基因在特定时间、空间的可控表达,本研究构建四环素(TET-ON)表达载体系统,并在细胞水平对该载体系统进行诱导活性验证.结果表明:(1)成功构建了重组载体pTRE-GH12；(2)筛选建立了可诱导表达GH的细胞系；(3)利用强力霉素(doxycycline,DOX)诱导阳性细胞克隆并检测外源GH的表达,QRT-PCR结果表明,实验组细胞在DOX诱导后表达活性是诱导前264.481倍;对照组细胞在DOX诱导前诱导后表达无明显变化,实验组和对照组细胞间差异极显著(P＜0.01),实验组DOX诱导前后差异极显著(P＜0.01)；(4)Western杂交后灰度分析结果和QRT-PCR趋势一致,实验组和对照组细胞间GH蛋白表达量差异极显著(P＜0.01),实验组DOX诱导前后GH蛋白表达量差异极显著(P＜0.01).研究结果提示,四环素(TET-ON)诱导猪生长激素(GH)表达系统实现了可控表达,为以后制备可诱导表达GH的转基因动物提供了技术基础.