瘤胃微生物Fosmid文库蛋白酶活性克隆的筛选与序列分析

• Published in: 农业生物技术学报 Vol. 20; no. 7; pp. 831 - 836
• Main Authors: 赵静雯, 王加启, 赵圣国, 卜登攀, 周凌云, 孙鹏
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 内蒙古民族大学动物科技学院,通辽028000%中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,北京,100193 2012; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,北京100193
• Subjects: 末端序列; 瘤胃微生物; 元基因组学; Fosmid文库; 蛋白酶
• ISSN: 1674-7968
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.07.014

在日粮蛋白质的降解过程中,蛋白酶是把蛋白质水解为肽或氨基酸的关键酶,由于受到纯培养技术的影响,瘤胃内产生蛋白酶活性的细菌和各种蛋白酶的遗传信息知之甚少.本实验旨在利用蛋白酶选择性培养基从瘤胃微生物Fosmid文库中筛选出含蛋白酶活性的克隆子,通过生物信息学分析获得这些克隆子的遗传信息.应用脱脂乳粉和大豆蛋白粉两种蛋白酶选择性培养基,从30 000个克隆中筛选得到14个具有蛋白酶活性的活性克隆.利用福林酚试剂法检测14个蛋白酶克隆子的酶活力,结果表明,每个克隆子分别具有不同的蛋白质分解能力.以酪蛋白为底物的克隆子酶活力介于0.59～2.74 U/mg之间,以大豆蛋白粉为底物的克隆子酶活力在0.70～7.19 U/mg之间,而且同一克隆对于不同的底物所表现的酶活力也不同.随机挑选10个活性克隆进行末端测序(GenBank登录号:JY084410～JY084429),经Blast比对后发现,45％的基因序列与已知编码基因无法匹配,pro 10F末端序列与金属肽酶匹配度为54％,属于肽酶M13家族,且该克隆蛋白酶最适pH值为7.0,为下一步研究该克隆的酶学性质和序列特征分析提供了基础资料.