Bach1在HaCaT细胞中对抗氧化应激的调控作用

• Published in: 皮肤性病诊疗学杂志 Vol. 32; no. 2; pp. 77 - 84
• Main Authors: 邹荟, 陈教全, 欧珊珊, 林天一, 陈紫嫣, 李华平, 李润祥, 彭丽倩, 朱慧兰
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广州医科大学,广东 广州 510182 2025; 广州市皮肤病医院,广东 广州 510095%广州市皮肤病医院,广东 广州 510095
• Subjects: HaCaT细胞; Bach1; HaCaT cells; 氧化应激; ROS; 活性氧; oxidative stress
• ISSN: 1674-8468
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8468.2025.02.001

目的 探讨调控转录因子BTB-CNC同源体1(Bach1)对下游相关抗氧化靶基因的调控机制及其防护氧化应激损伤的作用.方法 构建Bach1敲低的shRNA以及Bach1过表达克隆,通过慢病毒包装构建人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)整合株分别得到Bach1敲低组(Bach1-shRNA)、Bach1过表达组(Bach1-OE),同时分别用敲低和过表达对应的慢病毒空质粒和包装质粒整合收集后感染HaCat细胞得到敲低对照组(KD-control)、过表达对照组(OE-control).采用RT-qPCR以及Western blot验证Bach1的敲低及过表达效率,并分析下游相关抗氧化靶基因血红素氧合酶1(HO-1)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达差异.设置H2O2浓度梯度构建HaCaT细胞氧化应激损伤模型,采用CCK8检测各组细胞活性,予H2O2、UVB处理各整合株细胞后采用流式细胞仪检测各组细胞中的活性氧(ROS)水平.结果 与对照组KD-control比较,Bach1-shRNA组的Bach1 mRNA及蛋白的表达水平均下降(均P＜0.01);与对照组OE-control比较,Bach1-OE组的Bach1 mRNA及蛋白水平均升高(均P＜0.01).与对照组KD-control比较,Bach1-shRNA组的HO-1 mRNA表达水平升高(t=7.66,P＜0.01),而CAT、GPX、SOD mRNA的表达水平下降(均P＜0.01).CCK8检测显示,野生型HaCaT细胞经0～250 μM H2O2处理后细胞活性无明显变化,而经300 μM H2O2处理后细胞活性下降(P＜0.001).予250 μM H2O2或300 mJ/cm2 UVB处理HaCaT整合株细胞后,Bach1-shRNA 组相较于 KD-control 组的 ROS 水平均明显上升(H2O2:t=40.12;UVB:t=52.41,均P＜0.001),而 Bach1-OE 组相较于 OE-control 组的 ROS 水平均明显下降(H2O2:t=4.85;UVB:t=59.49,均P＜0.01).结论 下调转录因子Bach1表达可加剧HaCaT细胞氧化应激,而Bach1过表达可正向调控HaCaT抗氧化应激.