RNAi介导的GdHsp60和GdHsp70基因沉默对沙葱萤叶甲幼虫抗寒性的影响

• Published in: 昆虫学报 Vol. 65; no. 7; pp. 807 - 817
• Main Authors: 张宏玲, 任浩, 李凯旋, 田宇, 张恒, 李艳艳, 李玲, 庞保平, 谭瑶
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 内蒙古农业大学草原昆虫研究中心,呼和浩特010019%镶黄旗草原工作站,内蒙古镶黄旗013250%正镶白旗草原工作站,内蒙古正镶白旗013800 2022
• Subjects: 抗寒性; RNAi; GdHsp60; GdHsp70; 热激蛋白; 沙葱萤叶甲
• ISSN: 0454-6296
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2022.07.003

Q966; [目的]本研究旨在比较不同RNAi方法对沙葱萤叶甲Galeruca daurica幼虫热激蛋白基因(GdHsp60和QdHsp70)的沉默效率,以选择一种可高效降低靶基因表达水平的研究方法,明确这两个热激蛋白在沙葱萤叶甲幼虫抗寒性中的作用.[方法]分别通过饲喂法和显微注射法进行RNAi沉默沙葱萤叶甲1和2龄幼虫的GdHsp60和GdHsp70,采用qPCR检测GdHsp60和GdHsp70的沉默效率;通过显微注射法分别对GdHsp60和GdHsp70进行RNAi后24 h,用热电偶法测定沙葱萤叶甲2龄幼虫过冷却点和结冰点,生物测定沙葱萤叶甲2龄幼虫暴露于不同低温条件下(-6～-14℃)2 h的半致死温度(Ltemp50)以及在-5℃低温条件下处理不同时间后的半致死时间(Ltime50).[结果]用饲喂法和显微注射法进行RNAi均可以降低GdHsp60和GdHsp70的表达水平,但显微注射法的沉默效率更高.与对照组(显微注射dsGFP)相比,沙葱萤叶甲2龄幼虫分别显微注射dsGdHsp60和dsGdHsp70 24 h后,GdHsp60和GdHsp70的表达水平均降至最低,分别降低了 84.15％和92.38％.在沙葱萤叶甲2龄幼虫中,显微注射dsGdHsp60 24 h后其过冷却点、结冰点、Ltemp50及 Ltime50值分别为-10.56±0.42℃,-7.66±0.56℃,-8.33℃和 49.25 h,显微注射 dsGdHsp7024 h后其过冷却点、结冰点、Ltemp50及Ltime50 值分别为-9.08±0.23℃,-6.09±0.28℃,-8.20℃和 52.21 h,而对照组的分别为-14.71±0.11℃,-13.94±0.09℃,-10.63℃和 87.13 h.与对照组(显微注射dsGFP)相比,在沙葱萤叶甲2龄幼虫分别显微注射dsGdHsp60和dsGdHsp70 24 h后过冷却点、结冰点和Ltemp50显著上升,而Ltime50值显著缩短.[结论]显微注射法可作为沙葱萤叶甲Hsp相关基因RNAi的主要干扰方法;沉默GdHsp60和GdHsp70基因均会显著降低了沙葱萤叶甲幼虫的抗寒能力.