过表达和敲减ame-miR-13b对意大利蜜蜂幼虫肠道内基因表达的影响

• Published in: 昆虫学报 Vol. 65; no. 4; pp. 460 - 468
• Main Authors: 祝智威, 王杰, 隆琦, 许雅静, 冯睿蓉, 刘佳美, 赵浩东, 朱乐冉, 侯海青, 陈大福, 郭睿
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院),福州350002%福建农林大学动物科学学院(蜂学学院),福州350002 2022; 福建农林大学蜂疗研究所,福州350002
• Subjects: 意大利蜜蜂; 肠道; 微小RNA; 幼虫; ame-miR-13b; 靶基因
• ISSN: 0454-6296
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2022.04.006

S895.1; [目的]微小RNA(microRNAs,miRNAs)在昆虫的繁殖、发育和免疫等重要生命活动的调控过程中扮演关键角色.本研究旨在探究在意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica幼虫个体水平过表达与敲减ame-miR-13b对其靶基因表达的影响,为深入探究ame-miR-13b调控意大利蜜蜂幼虫肠道发育的分子机理提供理论和实验依据.[方法]根据ame-miR-13b的核苷酸序列设计合成相应的模拟物 mimic-ame-miR-13b 和抑制物 inhibitor-ame-miR-13b 及其对照 mimic-NC 和 inhibitor-NC,混入饲料后饲喂意大利蜜蜂3日龄幼虫,每12 h更换一次饲料,连续饲喂6次,以分别过表达和敲减ame-miR-13b;通过RT-qPCR检测过表达和敲减ame-miR-13b后意大利蜜蜂幼虫肠道中ame-miR-13b及其靶基因Ecr,Egfr和P450 18a1的表达量.[结果]与mimic-NC饲喂组相比,mimic-ame-miR-13b饲喂组中ame-miR-13b在意大利蜜蜂4和6日龄幼虫肠道中均显著上调表达;与饲喂inhibitor-NC组相比,inhibitor-ame-miR-13b饲喂组中ame-miR-13b在4日龄幼虫肠道中下调表达,在5和6日龄幼虫肠道中显著下调表达.与mimic-NC饲喂组相比,过表达ame-miR-13b组中意大利蜜蜂6日 龄幼虫肠道中Egfr的表达量显著降低,而Ecr和P45018a1的表达量均显著升高.与inhibitor-NC饲喂组相比,敲减ame-miR-13b组中意大利蜜蜂6日龄幼虫肠道中Egfr上调表达但不显著,Ecr显著上调表达,而P45018a1显著下调表达.[结论]通过饲喂法在意大利蜜蜂幼虫个体中成功实现了 miRNA的过表达和敲减;ame-miR-13b与Egfr之间存在潜在的负调控关系.