创伤弧菌溶细胞素对小鼠骨髓来源巨噬细胞坏死性凋亡的作用及机制

• Published in: 解放军医学杂志 Vol. 43; no. 5; pp. 419 - 423
• Main Authors: 帅维正, 刘剑飞, 吴成林, 刘妍, 蒲倩, 王欲晓, 周丽君, 张志成, 段蕴铀
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 100048北京 海军总医院ICU%100048北京,海军总医院中心实验科%100048北京,海军总医院ICU%200433上海,上海第二军医大学海军临床医学院 2018; 200433上海 上海第二军医大学海军临床医学院
• Subjects: 坏死性凋亡; 创伤弧菌; 依赖受体相互作用蛋白; 溶细胞素
• ISSN: 0577-7402
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2018.05.11

R378; 目的 探讨创伤弧菌溶细胞素(VVc)对永生化小鼠骨髓来源巨噬细胞(iBMDM)坏死性凋亡的作用及机制.方法 iBMDM细胞按照不同浓度的VVc刺激以及是否接受受体相互作用蛋白1(RIP1)特异性抑制剂Nec-1的预处理分为5组:对照组、Wc 2μg/ml组,VVc 4μg/ml组、Nec-1+VVc 2μg/ml组和Nec-1 +VVc 4μg/ml组.Nec-1各组在VVc处理前1h加入5μmol/L Nec-1,实验中各组在VVc处理2h后收集培养上清及细胞.采用乳酸脱氢酶(LDH)法评价VVc对细胞的毒性情况;采用流式细胞仪检测细胞状态;采用Western blotting检测细胞焦亡和坏死性凋亡相关蛋白GSDMD(gasdermin D protein)和混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)的表达.结果 培养基上清内LDH水平随Wc浓度上升而升高,且可被Nec-1预处理所抑制(P＜0.05).流式细胞检测结果显示,VVc处理后呈Annexin V/PI双标阳性的细胞比例明显增加,使用Nec-1预处理后,该比例明显下降(P＜0.05).Western blotting检测结果显示,VVc处理组pMLKL水平明显高于对照组和Nec-1 +VVc处理组(P＜0.05),各组均未观察到焦亡相关蛋白存在剪切体活性形式.结论 VVc可通过RIP1诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞发生坏死性凋亡.