葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的高效分泌表达

Q815; 为了获得高效分泌表达葡萄糖氧化酶(GOD)的毕赤酵母,采用黑曲霉来源的GOD基因序列,按照毕赤酵母的密码子偏好性进行优化,构建AOX1启动子诱导的分泌表达载体pPIC9K-GOD和重组菌G/GOD,通过提高遗传霉素G418浓度筛选到第1代高拷贝高产量重组菌G/GODM,单位细胞干重胞外产酶水平可达5843.2 U/g,为G/GOD最高产量的8.2倍.在此基础上,进一步构建第2代高产菌,分别考察了共表达不同辅助折叠因子和强化中心碳代谢途径基因对GOD产量的影响.结果表明,共表达辅助折叠因子PDI1、PDI2和HAC1,可使GOD的胞外产酶产量分别提高32.7％、8.9％和54.4％;...

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Published in华东理工大学学报（自然科学版） Vol. 47; no. 3; pp. 300 - 307
Main Authors 魏东升, 段广东, 钱江潮
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 华东理工大学生物反应器国家重点实验室,上海 200237 2021
Subjects
葡萄糖氧化酶
毕赤酵母
分泌表达
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Summary:Q815; 为了获得高效分泌表达葡萄糖氧化酶(GOD)的毕赤酵母,采用黑曲霉来源的GOD基因序列,按照毕赤酵母的密码子偏好性进行优化,构建AOX1启动子诱导的分泌表达载体pPIC9K-GOD和重组菌G/GOD,通过提高遗传霉素G418浓度筛选到第1代高拷贝高产量重组菌G/GODM,单位细胞干重胞外产酶水平可达5843.2 U/g,为G/GOD最高产量的8.2倍.在此基础上,进一步构建第2代高产菌,分别考察了共表达不同辅助折叠因子和强化中心碳代谢途径基因对GOD产量的影响.结果表明,共表达辅助折叠因子PDI1、PDI2和HAC1,可使GOD的胞外产酶产量分别提高32.7％、8.9％和54.4％;强化磷酸戊糖途径的SOL3基因和三羧酸循环的MDH1基因后,GOD的胞外产量提高了6.3％和11.6％.在50 L反应器中,共表达HAC1的高产菌G/GMH1胞外GOD单位菌体酶活(单位细胞干重)可达6656.6 U/g.
ISSN:1006-3080
DOI:10.14135/j.cnki.1006-3080.20200213001