紫玉兰'红元宝'花芽分化阶段基因定量分析的内参基因筛选

• Published in: 广西植物 Vol. 42; no. 1; pp. 113 - 121
• Main Authors: 章颖佳, 程少禹, 王卓为, 戴梦怡, 董彬, 张超, 张寿洲, 王亚玲, 申亚梅
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 浙江农林大学 风景园林与建筑学院,杭州311300 2022; 浙江农林大学 浙江省园林植物种质资源创新与利用重点实验室,杭州311300%仙湖植物园,广东 深圳518004%西安植物园,西安710061
• Subjects: 紫玉兰;内参基因;两次成花;qRT-PCR;微管蛋白基因
• ISSN: 1000-3142
• DOI: 10.11931/guihaia.gxzw202012047

Q943%S685.15; 为筛选紫玉兰'红元宝'(Magnolia liliflora'Hongyuanbao')二次花芽分化阶段稳定表达的内参基因,该研究以'红元宝'不同花芽分化时期的花芽和叶为材料,基于转录组数据,筛选出8个候选内参基因,即泛素酶基因(UBC)、肌动蛋白(ACT)、微管蛋白 β 链(β-TUB)、微管蛋白 β-5链(β-TUB5)、微管蛋白 α-3链(α-TUB3)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)、酰基载体蛋白2(ACP2)、酰基载体蛋白3(ACP3).运用Primer Premier 5设计引物,简单克隆和熔解曲线验证引物特异性;利用qRT-PCR技术检测各个候选内参基因的表达情况,结合GeNorm、NormFinder、BestKeeper软件和RefFinder在线工具综合评估其表达稳定性,并通过目的基因TFL1的表达分析验证其可靠性.结果表明:(1)8个候选内参基因条带位置正确,熔解曲线呈单一峰,说明引物特异性良好.(2)β-TUB、β-TUB5和α-TUB3是'红元宝'不同花芽分化时期较为稳定的内参基因,而UBC和ACT为稳定性最低的内参基因.(3)β-TUB5、α-TUB3、β-TUB及其组合的相对表达量趋于一致,而ACT和UBC并未对目的基因的表达量进行有效的标准化.因此,β-TUB、β-TUB5和α-TUB3可作为'红元宝'二次花芽分化研究中稳定表达的内参基因.该研究结果将为木兰属植物二次成花分子调控机制研究提供依据.