凡纳滨对虾ATG13基因克隆及其功能分析

• Published in: 南方农业学报 Vol. 55; no. 5; pp. 1471 - 1479
• Main Authors: 黎国建, 袁韵昊, 钟键, 骆俊良, 杨世平
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广东海洋大学水产学院/广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室/广东省水产经济动物病害控制重点实验室,广东湛江 524088%湛江海关,广东湛江 524022 2024
• Subjects: 自噬; autophagy; Vibrio harveyi; ATG13 gene; 哈维氏弧菌; ATG13基因; Poly(I∶C); Litopenaeus vannamei; 凡纳滨对虾
• ISSN: 2095-1191
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2024.05.023

S945.49; [目的]克隆凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)自噬相关基因13(ATG13),并分析凡纳滨对虾ATG13基因的组织表达特征及其在外源刺激后的表达变化,为探究ATG13基因在凡纳滨对虾抗病原感染过程中的作用机制提供理论依据.[方法]采用PCR扩增凡纳滨对虾ATG13基因,通过ProtParam、Softberry、SMART、InterProScan等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾ATG13基因的组织表达特征及其在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)和Poly(I∶C)刺激后的表达变化.[结果]凡纳滨对虾ATG13基因开放阅读框(ORF)为1431 bp,共编码476个氨基酸残基;凡纳滨对虾ATG13蛋白相对分子量为52.4 kD,理论等电点(pI)为5.40,属于疏水性蛋白,不存在信号肽,但其N末端存在1个ATG13功能域(第94～167位氨基酸处).凡纳滨对虾ATG13氨基酸序列与果蝇(Drosophila melano-gaster)ATG13氨基酸序列的相似性高达97%,基于ATG13氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示凡纳滨对虾与果蝇的亲缘关系最近.ATG13基因在凡纳滨对虾肝胰腺、肌肉、鳃、中肠、血细胞、心脏、脑和皮肤等组织中均有不同程度的表达,以肝胰腺中的相对表达量最高,其次是肌肉和中肠,在皮肤和血细胞中的相对表达量较低.经哈维氏弧菌和poly(I∶C)刺激后,凡纳滨对虾ATG13基因在肝胰腺、中肠和鳃组织中的相对表达量整体上呈先上升后下降的变化趋势,且在刺激后12、24或48 h达最高值,极显著高于对照组(PBS)(P<0.01).[结论]受哈维氏弧菌或poly(I∶C)等外源刺激后,凡纳滨对虾通过上调自噬相关基因ATG13表达以调控机体清除受损的细胞器和维持细胞稳态,即ATG13基因参与凡纳滨对虾抗病原感染的响应过程.