血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

• Published in: 南方农业学报 Vol. 54; no. 10; pp. 3092 - 3099
• Main Authors: 罗思思, 邓显文, 谢芝勋, 张艳芳, 张民秀, 谢志勤, 谢丽基, 李孟, 王盛, 李小凤
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)—东盟跨境动物疫病防控重点实验室,广西南宁 530001 2023
• Subjects: fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4); 血清4型禽腺病毒; penton protein; 杂交瘤细胞株; hybridoma cell line; penton蛋白; 单克隆抗体; monoclonal antibodies
• ISSN: 2095-1191
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2023.10.028

S852.659.1; [目的]制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料.[方法]以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6～8周雌性BALB/c小白鼠,加强免疫3次后,取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过penton-酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株,对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验.[结果]亚类鉴定结果表明,筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株(1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11),其轻链均为Kappa链,重链3株为IgG1,4株为IgG2b;特异性检测结果表明,7株单克隆抗体只与FAdV-4反应,不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应;广谱性鉴定结果表明,7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合,广谱性好;间接免疫荧光试验结果表明,7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞(CEL)结合,出现明亮的绿色荧光.对筛选出的3株单克隆抗体(6B3、8F12和8G11)进行稳定性检测,发现其稳定性良好.[结论]通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株(6B3、8F12和8G11),能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体,为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗,为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础.