水牛Tle6基因表达模式分析及其多克隆抗体制备

• Published in: 南方农业学报 Vol. 52; no. 6; pp. 1692 - 1700
• Main Authors: 陈东荣, 黄星晨, 张俊俊, 杨维菡, 张明, 付强
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室/广西大学动物繁殖研究所,南宁 530004 2021
• Subjects: 水牛;Tle6基因;卵母细胞;胚胎;多克隆抗体;母源效应基因
• ISSN: 2095-1191
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2021.06.030

S823.83; [目的]明确水牛Tle6基因表达组织特异性及其在卵母细胞和早期胚胎中的表达模式,并通过构建原核表达载体诱导表达融合蛋白及免疫小鼠制备TLE6多克隆抗体,为进一步揭示Tle6基因在水牛生殖发育中的作用机制提供理论依据.[方法]采用RT-PCR扩增水牛Tle6基因编码区(CDS)序列,经生物信息学分析后,分别以半定量PCR和实时荧光定量PCR检测分析水牛Tle6基因表达组织特异性及其在卵母细胞和早期胚胎中的表达模式.构建重组原核表达载体,以IPTG诱导表达的融合蛋白免疫小鼠制备TLE6多克隆抗体,再利用TLE6多克隆抗体检验TLE6蛋白在水牛不同组织及卵母细胞和早期胚胎中的表达情况.[结果]水牛Tle6基因CDS序列全长1731 bp,编码576个氨基酸残基,其编码蛋白分子量为64.09 kD,理论等电点(pI)为5.69,属于亲水性蛋白.Tle6基因仅在水牛的卵母细胞中特异性表达.重组原核表达载体pET-32a-Tle6转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导6 h,融合蛋白TLE6的表达量最高,且以可溶性蛋白和包涵体2种形式进行表达;以纯化的融合蛋白TLE6免疫小鼠成功制备获得TLE6多克隆抗体,其抗体效价为1:64000,能与融合蛋白TLE6及水牛卵母细胞发生特异性反应,即具有很强的特异性.[结论]Tle6基因仅在水牛卵母细胞中特异性表达,而在其他组织中未见表达.不同于其他MEGs的表达模式,Tle6基因在水牛卵母细胞及胚胎早期发育过程中呈特异性持续表达,可能在水牛卵母细胞成熟及附植前的胚胎发育过程中发挥重要作用.