PK15细胞cDNA T7噬菌体展示文库的构建及鉴定

• Published in: 南方农业学报 Vol. 44; no. 8; pp. 1372 - 1376
• Main Authors: 王国栋, 邓小芸, 刘书梅
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳,455000%黑龙江职业学院动物医学学院,哈尔滨,150080 2013
• Subjects: PK15 cells; T7噬菌体展示文库; T7 phage display library; identification; 鉴定; construction; cDNA; 构建; PK15细胞
• ISSN: 2095-1191
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.8.1372

S858.28; [目的]构建PK15细胞cDNA T7噬菌体展示文库,为研究猪源病毒与宿主细胞的相互作用奠定基础.[方法]分离纯化PK15细胞mRNA,先后合成第一链和第二链cDNA,经平末端修饰后,定向导入EcoRⅠ和Hind Ⅲ接头,再由EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切消化,与噬菌体载体臂相连,然后用噬菌体包装抽提物进行体外包装,形成初级cDNA T7噬菌体展示文库,并通过滴度测定和PCR鉴定文库质量.[结果]经噬斑试验鉴定,初级文库滴度为2.0×105 PFU/mL,扩增后滴度达6.0× 1010 PFU/mL.PCR鉴定结果显示,文库的重组率为95.83％,且插入片段主要分布于500～2000 bp,其中500～750 bp的占21.73％,750～100 bp的占21.73％,1000～2000 bp的占39.13％.随机挑选20个克隆进行测序,发现均为猪源序列.[结论]构建的PK15细胞cDNA T7噬菌体展示文库具备较高库容量和重组率,质量良好,符合后续文库筛选的要求,可用于研究猪源病毒蛋白与PK15细胞的相互作用.