基于DNAzyme催化介导双循环等温信号扩增策略的高灵敏牛结核杆菌传感方法研究

• Published in: 分析化学 Vol. 50; no. 12; pp. 1822 - 1831
• Main Authors: 傅昕, 杨苑, 张何, 杨梅, 张培柔, 刘琼, 李倩
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 湖南工程学院材料与化工学院,湖南省环境催化与废弃物再生化重点实验室,湘潭411104 2022
• Subjects: 双循环信号放大; 等温扩增; 牛结核分枝杆菌; 8-17 DNAzyme
• ISSN: 0253-3820
• DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.221343

建立了一种8-17 DNAzyme催化介导双循环等温信号放大的牛结核分枝杆菌高灵敏荧光传感方法.牛结核杆菌靶序列与探针H1杂交,导致其发夹结构发生变化,发夹环部缩小,此时Pb2+激活的8-17 DNAzyme活性中心作用于切割位点,释放出引发链和牛结核杆菌靶序列,释放的牛结核杆菌靶序列被重新利用,与H1杂交构建上游循环.引发链与H2杂交打开其发夹结构,随后信号链S3与打开后的H2结合,并被Pb2+激活的8-17 DNAzyme活性中心识别,切割释放出荧光报告基团,打开的H2可重复利用与S3杂交结合并切割,构建下游循环.在最优实验条件下,对牛结核分枝杆菌特异性序列检测的线性范围为200 amol/L～1 pmol/L,检出限为100 amol/L(S/N=3),回归方程为F=4.834lgC(牛结核杆菌靶序列,amol/L)+4.057.将此方法应用于牛血液中牛结核分支杆菌含量检测,加标回收率在93.2％ ～107.1％之间.本方法操作简单、选择性好、灵敏度高,检测时间只需60 min,可用于牛血中牛结核分枝杆菌的高灵敏、快速检测.