DIRECTED PROTEOLYSIS OF FIBRINOGEN BY PROTEASE OF Gloydius halys halys VENOM

• Published in: Biotechnologia acta Vol. 14; no. 6; pp. 37 - 43
• Main Authors: Stohnii, Ye M, Rebriev, A V, Hornytska, O V, Slominskiy, O Yu, Kostiuchenko, O P, Klymenko, K P, Chernyshenko, V O
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: Kyiv Palladin Institute of Biochemistry of National Academy of Sciences of Ukraine 01.11.2021
• Subjects: Biological activity; Blood coagulation; Chains; Electrophoresis; Fibrinogen; Fragments; Gel electrophoresis; Gloydius halys halys; Macromolecules; Mathematical analysis; Molecular chains; Molecular weight; Monoclonal antibodies; Peptides; Polypeptides; Protease; Proteinase; Proteins; Proteolysis; Proteolytic enzymes; Sodium lauryl sulfate; Structure-function relationships; Venom
• ISSN: 1995-5537
• DOI: 10.15407/biotech14.06.037

Мета. Одним İ3 пiдходiв до вивчення структури та функци npoTeÍHÍB e Íx обмежений протеол^. Отриманi шляхом гiдролiзу фрагменти протеМв також можуть мати бмлопчну активнiсть, що може бути використано в дослщженш структурно-функцiональних особливостей цих макромолекул. Тому актуальним e пошук селективних протеíназ та визначення специфшносм íхньоí дií. В цiй робой дослщжувалася дiя протеíнази з отрути Gloydius halys halys (щитомордника звичайного) на ф^риноген - основний протеш системи згортання кровь Методи. Продукти гщрол^у ф^риногену протеíназою отрути G. halys halys дослщжували за допомогою методiв електрофорезу у полiакриламiдному гелi та вестерн-блоту з використанням моноклональних антитьл II-5C (анти-Ла20-78) та1-5А (анти-Ла549-610). Молекулярну масу продуктiв гiдролiзу визначали за допомогою MALDI-TOF мас-спектрометрií на Voyager DE PRO (США). Послщовноси, як вiдщеплюються вiд фiбриногену дослщжуваною протеíназою, встановлювали за допомогою програмного забезпечення «PeptideMassCalculator». Результати. Електрофоретичний анал^ показав, що протеíназа з отрути G. halys halys найбьльш специфшно розщеплюе Аа-ланцюг молекули фiбриногену. За допомогою вестерн-блот анал^у було виявлено, що протешаза вiдщеплюe фрагмент з молекулярною масою приблизно 22 ^а вiд C-кiнця Аа-ланцюга молекули ф^риногену. Вiдщеплюваний фрагмент було iдентифiковано MALDI-TOF аналiзом як полiпептид з масою 21,1 ^а. Згiдно програми «PeptideMassCalculator», цей фрагмент вщповщае послiдовностi Аа414-610. Отже, протеíнaзa, видiлена з отрути G. halys halys, специфшно гщрол^уе пептидний зв'язок ЛаK413-L414 з утворенням стабiльноí частково гiдролiзованоí форми - ф^риногену desЛа414-610. Висновок. Використовуючи дослщжувану протеíназу, видiлену з отрути G. halys halys, можна отримати уншальний частково гщрол^ований фрагмент фiбриногену, позбавлений дьлянки Аа414-610, 610, яка дозволить дослщити структурно-функцiональнi особливостi аC-регiонiв ф^рин(оген)у.