사람 신경모세포종에서 아밀로이드베타(Aß25-35) 투여 후 사립체기능 장애와 세포자멸사 관련 유전자들의 발현

• Published in: Annals of geriatric medicine and research pp. 141 - 151
• Main Authors: 최영숙, 김상호
• Format: Journal Article
• Language: Korean
• Published: 대한노인병학회 01.09.2009
• Subjects: 가정의학
• ISSN: 2508-4798; 2508-4909

연구배경: 사립체 기능부전은 알츠하이머병에서 Aβ에 의하여 유도되는 신경세포독성에 중요한 역할을 담당한다. 본 연구에서는 사람 신경모세포종 세포주인 SK-H-SH에서 Aβ 투여에 의한 사립체 기능과 관련 유전자 및 세포자멸사 유전자들의 발현 정도를 측정하였다. 방법: SK-N-SH에 25 μM의 Aβ25-35를 투여한 후 24시간째 에 사립체의 막전위(△Ψm)변동을 flow cytometry로 측정하였고, COX, cytochrome c, SDH, ABAD, caspase 9 및 Bcl- 2 유전자의 발현 정도를 실시간 역전사 중합효소반응으로 0-24시간까지 kinetic study로 정량하였다. MTT reductionassay로 세포생존율을 측정하였다. 결과: △Ψm은 24시간째에 현저히 감소하였다. COX mRNA는 24시간까지 지속적으로 감소하였으며(p<0.05), cytochrome c, SDH, ABAD 및 caspase 9 mRNA는 24시간까지 지속적으로 그 발현이 각각 증가(p<0.05)하였다. Bcl-2 의 발현은 24시간까지 서서히 감소(p<0.05)하였다. 세포사망률은 최대 24%이었다(p<0.01). 결론: 세포 밖 Aβ25-35 투여는 SK-N-SH 세포 내 사립체기능을 직접 방해하여 세포자멸사를 유발함을 확인할 수 있었다. Background: Mitochondrial dysfunction plays an important role in Aβ-induced neuronal toxicity in Alzheimer`s disease (AD). We measured the membrane potentials of mitochondria (△Ψm) and assessed the genetic expressions of Aβ25-35- induced neurotoxicity in the human neuroblastoma cell line, SK-N-SH cell. Methods: SK-N-SH cells were incubated with a single dose of 25 μM Aβ25-35 for 0-24 hours, and kinetic study was done. △Ψm was measured by flow cytometry. Messenger RNA expressions of cytochrome c oxidase (COX), cytochrome c, succinate dehydrogenase (SDH), amyloid-β alcohol dehydrogenase (ABAD), caspase 9, and Bcl-2 were measured by quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (real-time RT-PCR). Cell death rate was measured by MTT reduction assay. Results: △Ψm was reduced at 24 hours. mRNA expression for COX gradually decreased by about 29%(p<0.05) whileexpressions for cytochrome c, SDH, ABAD, and caspase 9 increased (p<0.05) progressively during the 24-hour time period. Bcl-2 expression decreased (p<0.05) gradually; and apoptotic cell death rate was about 24%(p<0.01) by 24 hours. Conclusion: Extracellular administration of Aβ25-35 contributes directly to mitochondrial dysfunction in SK-N-SH cells with the enzymatic impairment of the tricarboxylic acid cycle and electron transport chain, and eventually leading to apoptotic cell death. KCI Citation Count: 1