METHODS AND REAGENTS FOR QUANTITATIVELY DETERMINING ASCORBIC ACID

• Main Authors: TAGA, KATSUYUKI, MIIKE, AKIRA, FUJISHIRO, KINYA, AOYAMA, NORIHITO
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 23.07.1998
• Edition: 6
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PHYSICS; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; TESTING; VINEGAR; WINE

A method for determining ascorbic acid by quantitatively determining ascorbic acid in a sample by using an ascorbate oxidase (hereinafter referred to as "ASOD") capable of catalyzing a reaction of ascorbic acid of reduced form with oxygen to produce ascorbic acid of oxidized form and hydrogen peroxide, characterized by simultaneously conducting a reaction of ascorbic acid of reduced form with oxygen to produce ascorbic acid of oxidized form and hydrogen peroxide and a reaction of the resultant hydrogen peroxide with a chromogen in the presence of a peroxidase to produce a dye in the same reaction system in an aqueous medium in the presence of ASOD and the formed dye quantitatively determining. A method for quantitatively determining total ascorbic acid by adding a reducing agent capable of reducing ascorbic acid of oxidized form to ascorbic acid of reduced form to the above aqueous medium to conduct an enzymatic reaction, whereby total ascorbic acid present in a low concentration can be quantitatively determined. Another method for quantitatively determining total ascorbic acid by reducing ascorbic acid of oxidized form in the sample with a reducing agent capable of reducing ascorbic acid of oxidized form to ascorbic acid of reduced form and conducting an enzymatic reaction in the presence of a compound capable of depriving the reducing agent of the reducing power. A reagent for quantitatively determining ascorbic acid and a kit for quantitatively determining ascorbic acid used for the above quantitative determination methods. The above methods can be applied also to the screening for a clinical test, can simultaneously determine a plurality of analytes, and are simple. L'invention concerne un procédé permettant d'évaluer la teneur en acide ascorbique d'un échantillon par utilisation d'une oxydase d'ascorbate ou "ASOD" capable de catalyser une réaction de l'acide ascorbique réduit avec l'oxygène pour obtenir de l'acide ascorbique oxydé et du peroxyde d'hydrogène. Ledit procédé est caractérisé en ce qu'il consiste à conduire simultanément, d'une part une réaction de l'acide ascorbique réduit avec l'oxygène permettant d'obtenir de l'acide ascorbique oxydé et du peroxyde d'hydrogène, et d'autre part, en présence d'une peroxydase, une réaction du peroxyde d'hydrogène de la première réaction avec un chromogène, lequel chromogène permet de produire un colorant dans le même système réactif en milieu aqueux et en présence d'ASOD, et d'évaluer la teneur en colorant ainsi produit. L'invention concerne également un procédé d'évaluation de la teneur totale en acide ascorbique par adjonction d'un réducteur capable de réduire l'acide ascorbique oxydé en acide ascorbique réduit, dans le milieu aqueux décrit ci-dessus, afin de conduire une réaction enzymatique permettant d'évaluer la teneur totale d'acide ascorbique présent à faible concentration. L'invention concerne aussi un autre procédé permettant d'évaluer la teneur totale en acide ascorbique par réduction de l'acide ascorbique oxydé dans l'échantillon au moyen d'un réducteur capable de réduire l'acide ascorbique oxydé en acide ascorbique réduit et de conduire une réaction enzymatique en présence d'un composé capable de neutraliser le réducteur. L'invention concerne enfin un réactif permettant d'évaluer la teneur en acide ascorbique et un nécessaire permettant d'évaluer la teneur en acide ascorbique utilisé pour les procédés d'évaluation de la teneur en acide ascorbique décrits ci-dessus. Les procédés ci-dessus sont simples. Ils conviennent également au criblage lors d'un test clinique et à l'évaluation simultanée d'une pluralité d'analytes.