IN-SITU HYBRIDIZATION METHOD USING RecA PROTEIN AND RecA PROTEIN HAVING MARKER OR LIGAND FOR USE IN SAID METHOD

• Main Authors: MUKAI, ELI, OBATA, KAZUAKI, KIGAWA, KOJI, KIHARA, KAYO, YAMANAKA, MIKAYO
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 06.07.1995
• Edition: 6
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ARTCOLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS; VINEGAR; WINE

A method for detecting the presence of a target double-stranded nucleic acid sequence in an immobilized cell or cell structure, which method involves the step of immobilizing a cell or a cell structure in such a manner as to permit the invasion by a nucleic acid probe and the step of preparing a probe-RecA composite comprising a single-stranded probe and a RecA protein bonded to each other stably. The presence of a target double-stranded nucleic acid sequence is detected by binding the probe-RecA composite to a target double-stranded nucleic acid sequence through the reaction therebetween under the condition where the target nucleic acid sequence does not undergo denaturation and detecting the RecA protein contained in the composite. The invention method provides a diagnostically important method whereby the position of a specified gene or a regulatory region thereof in a chromosome or the presence of a virus-origin nucleic acid sequence can be determined or visualized readily at a high sensitivity. L'invention concerne un procédé permettant de détecter la présence d'une séquence nucléotidique cible d'un acide nucléique bicaténaire dans une cellule ou une structure cellulaire immobilisée. Ledit procédé consiste à immobiliser une cellule ou une structure cellulaire de façon à permettre la pénétration d'une sonde à l'acide nucléique, et à préparer un composite sonde-RecA comprenant une sonde monocaténaire et une protéine RecA liées mutuellement de façon stable. La présence d'une séquence nucléotidique cible d'acide nucléique bicaténaire est détectée par liaison du composite sonde-RecA à une séquence nucléotidique cible d'un acide nucléique bicaténaire, la réaction entre le composite et la séquence nucléotidique se faisant dans des conditions telles que la séquence nucléotidique cible ne subit aucune dénaturation, et par détection de la protéine RecA contenue dans ledit composite. L'invention offre un procédé diagnostique important permettant de déterminer ou de visualiser facilement, avec une haute sensibilité, la position d'un gène spécifié ou d'une région régulatoire de ce gène dans un chromosome, ou bien la présence d'une séquence nucléotidique d'origine virale.