METHOD OF TRANSFORMING PLANT AND VECTOR THEREFOR

• Main Authors: SAITO, YASUHITO, KOMARI, TOSHIHIKO, HIEI, YUKOH
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 15.06.1995
• Edition: 6
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

A method of plant transformation whereby a regenerated transgenic plant containing desired genes introduced thereinto is prepared at a high efficiency and which permits the preparation in the subsequent generation of a transgenic plant containing the desired genes but not the drug-resistant genes used as the selection marker. The method comprises transforming a plant by means of agrobacteria and is characterized by cotransforming plant cells with a first T-DNA(1) which functions in plants and contains the drug-resistant genes and a second T-DNA(2) which is contained in the following hybrid vector and contains, inserted therein, desired DNA fragments to be introduced into the plant. The hybrid vector is one prepared by the homologous recombination between the following acceptor vector and the following intermediate vector in agrobacteria. The acceptor vector contains at least (a) a DNA region having the function of plasmid replication which is effective in agrobacteria and colibacilli, (b) a DNA region containing vir B and vir G genes of the virulent region of Ti plasmid pTiBo542 of Agrobacterium tumefaciens, and (c) a DNA region which is homologous with part of the following intermediate vector and is capable of homologous recombination via that part in agrobacteria. The intermediate vector contains at least (i) a DNA region having the function of plasmid replication which is effective in colibacilli but ineffective in agrobacteria, (ii) a DNA region which is homologous with part of the above acceptor vector and is capable of homologous recombination via that part in agrobacteria, and (iii) a DNA region which constitutes at least part of the second T-DNA(2). On décrit un procédé de transformation de plantes qui permet de préparer à haut rendement, une plante transgénique régénérée contenant des gènes souhaités qui y ont été introduits, ce qui permet de préparer, dans la génération suivante, des plantes transgéniques contenant ces gènes souhaités mais pas les gènes de résistance à un produit qui ont servi de marqueur de sélection. Ce procédé consiste à transformer une plante avec des agrobactéries et se caractérise par la co-transformation de cellules végétales avec un premier ADN-T(1), qui fonctionne dans les plantes et contient des gènes de résistance à un produit, et un deuxième ADN-T(2), placé dans le vecteur hybride décrit ci-après et contenant des fragments insérés de l'ADN souhaité qu'on veut introduire dans la plante. Ce vecteur hybride s'obtient par recombinaison homologue, dans l'agrobactérie entre le vecteur accepteur et le vecteur intermédiaire décrits ci-dessous. Le vecteur accepteur contient au moins (a) une région d'ADN dotée de la fonction de réplication de plasmides qui est efficace chez les agrobactéries et les colibacilles, (b) une région d'ADN contenant les gènes vir B et vir G de la région virulente du plasmide Ti pTiBo542 d'Agrobacterium tumefaciens, et (c) une région d'ADN qui est homologue d'une partie du vecteur intermédiaire décrit ci-après et capable de recombinaison homologue par l'intermédiaire de cette partie de l'agrobactérie. Le vecteur intermédiaire contient au moins: (i) une région d'ADN à fonction de réplication de plasmides qui est efficace chez les colibacilles mais pas chez les agrobactéries, (ii) une région d'ADN qui est homologue d'une partie du vecteur accepteur décrit ci-dessus et capable de recombinaison homologue par l'intermédiaire de cette partie de l'agrobactérie, et (iii) une région d'ADN qui constitue au moins une partie du deuxième ADN-T(2).