BABY HAMSTER KIDNEY (BHK) CELLS TRANSFORMED WITH THE ADENOVIRAL E1 GENE FOR PRODUCTION OF RECOMBINANT ADENO-ASSOCIATED VIRUS

• Main Authors: CHAMBERS, Michael, LOGANATHAN, Jagadish, BALLANTYNE, John, PLAMBECK, Amber, BROWN, James, NOYSZEWSKI, Andrzej
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 08.08.2024
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Disclosed is the creation of new E1-complementing BHK-21 cell lines to produce recombinant adeno-associated virus (rAAV) vectors. The new cell lines stably express the E1 gene region of adenovirus or a portion thereof and produce the E1 proteins. Transient production in the E1-complementing cell lines of the AAV rep/cap proteins, helper proteins and an AAV transfer plasmid containing the desirable transgene flanked by the Inverted Terminal Repeat (ITR) sequences of AAV, results in production of rAAV particles containing the transgene. Further disclosed is scaled-up production, harvesting and purification of transgene-containing rAAV. The purified rAAV has demonstrated capability to infect a host cell line and express the protein encoded by the transgene. The disclosure provides non-human, non-embryonic cell lines for production of rAAV particles that are a platform for delivery of a desired transgene. L'invention porte sur la création de nouvelles lignées cellulaires BHK-21 complétant E1 pour produire des vecteurs de virus adéno-associés recombinés (rAAV). Les nouvelles lignées cellulaires expriment de manière stable la région du gène E1 de l'adénovirus ou une partie de celui-ci et produisent les protéines E1. La production transitoire, dans les lignées cellulaires complétant E1, des protéines rep/cap de l'AAV, des protéines auxiliaires et d'un plasmide de transfert de l'AAV contenant le transgène souhaité flanqué des séquences ITR (répétition terminale inversée) d'AAV, aboutit à la production de particules d'AAVr contenant le transgène. L'invention porte également sur la production, la récolte et la purification à grande échelle de rAAV contenant des transgènes. Le rAAV purifié présente une capacité démontrée à infecter une lignée cellulaire hôte et à exprimer la protéine codée par le transgène. La présente invention concerne des lignées cellulaires non humaines et non embryonnaires pour la production de particules rAAV qui constituent une plate-forme pour l'administration d'un transgène souhaité.