METHOD FOR INTRODUCING NUCLEIC ACID INTO CELLS AND APPLICATION THEREOF

• Main Authors: MURAGUCHI Taichi, MORIYA Kai, SATO Ryota, NISHINO Masafumi
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 29.02.2024
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention addresses the problem of providing: a method for introducing a nucleic acid into cells, wherein the method can efficiently introduce a high-concentration nucleic acid into high-density cells as a complex of the nucleic acid and a cationic polymer; a method for producing cells with nucleic acid introduced and a method for producing a useful substance; and a composition containing a cationic polymer and a nucleic acid, and a cell culture containing the composition and cells. The present invention provides a method for introducing a nucleic acid into cells comprising: (a) a complex formation step that mixes a cationic polymer and a nucleic acid to obtain a solution of a complex of the cationic polymer and nucleic acid, wherein the concentration of the nucleic acid in the complex formation step is 100-1000 μg/mL and the electrical conductivity of the mixed complex solution is 1.0-7.0 mS/cm; and (b) a transfection step that adds the complex solution obtained in step (a) to a cell suspension. La présente invention a pour but de procurer : un procédé d'introduction d'un acide nucléique dans des cellules, le procédé permettant d'introduire efficacement un acide nucléique à haute concentration dans des cellules à haute densité sous la forme d'un complexe de l'acide nucléique et d'un polymère cationique ; un procédé de production de cellules dans lesquelles l'acide nucléique a été introduit et un procédé de production d'une substance utile ; et une composition contenant un polymère cationique et un acide nucléique, ainsi qu'une culture cellulaire contenant la composition et les cellules. La présente invention concerne un procédé d'introduction d'un acide nucléique dans des cellules comprenant : (a) une étape de formation de complexe qui mélange un polymère cationique et un acide nucléique pour obtenir une solution d'un complexe du polymère cationique et de l'acide nucléique, la concentration de l'acide nucléique dans l'étape de formation de complexe étant comprise entre 100 et 1000 μg/mL et la conductivité électrique de la solution de complexe mélangé étant comprise entre 1,0 et 7,0 mS/cm ; et (b) une étape de transfection qui ajoute la solution de complexe obtenue à l'étape (a) à une suspension cellulaire. 本発明の課題は、細胞へ核酸を導入する方法であって、高密度の細胞に対して高濃度の核酸を、核酸とカチオン性ポリマーとの複合体として、効率よく導入できる方法；核酸を導入した細胞の製造方法、並びに有用物質の製造方法；並びにカチオン性ポリマーと核酸とを含む組成物、並びに上記組成物と細胞とを含む細胞培養物、を提供することである。本発明によれば、（ａ）カチオン性ポリマーと核酸とを混合してカチオン性ポリマー及び核酸の複合体の溶液を得る複合体形成工程であって、上記複合体形成工程において上記核酸の濃度が１００～１０００μｇ／ｍＬであり、混合後の複合体溶液の電気伝導度が１．０～７．０ｍＳ／ｃｍである複合体形成工程；及び（ｂ）工程（ａ）で得られた複合体溶液を細胞懸濁液に添加するトランスフェクション工程；を含む、細胞へ核酸を導入する方法が提供される。