GENOME EDITING OF B CELLS

• Main Author: ZURIS, John Anthony
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 16.11.2023
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Strategies, systems, compositions, and methods for efficient production of knock-in cellular clones without reporter genes. An essential gene is targeted using a knock- in cassette that comprises an exogenous coding sequence for a gene product of interest (or "cargo sequence") in frame with and downstream (3 ') of an exogenous coding sequence or partial coding sequence of the essential gene. Undesired targeting events create a non- functional version of the essential gene, in essence a knock-out, which is "rescued" by correct integration of the knock-in cassette, which restores the essential gene coding region so that a functional gene product is produced and positions the cargo sequence in frame with and downstream of the essential gene coding sequence. L'invention concerne des stratégies, des systèmes, des compositions et des procédés de production efficace de clones cellulaires « knock-in » sans gènes rapporteurs. Un gène essentiel est ciblé à l'aide d'une cassette « knock-in » qui comprend une séquence de codage exogène pour un produit génique d'intérêt (ou « séquence cargo ») en phase avec une séquence de codage exogène ou une séquence de codage partielle du gène essentiel, et en aval (3') de celle-ci. Des événements de ciblage non souhaités créent une version non fonctionnelle du gène essentiel, en somme un « knock-out », qui est « sauvé » par une intégration correcte de la cassette « knock-in », qui restaure la région de codage du gène essentiel de telle sorte qu'un produit génique fonctionnel soit produit, et qui positionne la séquence cargo en phase avec la séquence de codage du gène essentiel et en aval de celle-ci.