GENERATION OF LANDING PAD CELL LINES

• Main Authors: TREMML, Gabriele, MCVEY, Duncan Lochiel, GARG, Charu, KHETAN, Anurag, WANG, Chaojie
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 06.07.2023
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The disclosure provides methods to generate landing pad cells for targeted gene integration comprising integrating a landing pad plasmid into the genome of a parental cell at a targeted-integration site, for example, using homologous recombination. In one aspect, two site-specific recombination sites (SSRSs) flank a polynucleotide sequence; and, two homologous recombination sites are located 5' and 3' terminally with respect to the SSRSs. The two homologous recombination sites of the landing pad plasmid can recombine with corresponding homologous recombination sites on the parental plasmid, thereby integrating the landing pad plasmid at an internal location within the parental plasmid. The methods disclosed allow the generation of high expressing cell lines by identifying hot spots for targeted-integration in hot cell lines. The disclosure provides also cell and kits comprising cells and/or reagents for the generation of landing pad cells of the present disclosure. Also provided are novel hot spots for targeted integration. La divulgation concerne des procédés permettant de générer des cellules avec site d'intégration pour une intégration génique ciblée consistant à intégrer un plasmide de site d'intégration dans le génome d'une cellule parentale au niveau d'un site d'intégration ciblée, par exemple, à l'aide d'une recombinaison homologue. Selon un aspect, deux sites de recombinaison spécifiques à un site (SSRS) flanquent une séquence polynucléotidique ; et deux sites de recombinaison homologues sont situés à l'extrémité 5' et 3' par rapport au SSRS. Les deux sites de recombinaison homologue du plasmide de site d'intégration peuvent se recombiner avec des sites de recombinaison homologue correspondants sur le plasmide parental, ce qui permet d'intégrer le plasmide de site d'intégration en un emplacement interne à l'intérieur du plasmide parental. Les procédés divulgués permettent de générer des lignées de cellules à forte expression par l'identification de points chauds pour une intégration ciblée dans des lignées de cellules à points chauds. La divulgation concerne également une cellule et des kits comprenant des cellules et/ou des réactifs pour générer les cellules avec site d'intégration selon la présente divulgation. La divulgation concerne aussi de nouveaux points chauds pour une intégration ciblée.