METHOD FOR MEASURING PYROPHOSPHORIC ACID OR PHOSPHORIBOSYL PYROPHOSPHATE, MEASUREMENT COMPOSITION AND REAGENT KIT FOR MEASURING SAME, AND AMPLIFICATION METHOD THEREOF

• Main Authors: HIRATA, Tatsuya, UEDA, Shigeru, SAKASEGAWA, Shinichi
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 04.05.2023
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PHYSICS; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; TESTING; VINEGAR; WINE

Provided are a method for measuring pyrophosphoric acid or phosphoribosyl pyrophosphate, said method achieving a high sensitivity, enabling detection with a general-purpose device and being easy to operate, a measurement composition and a reagent kit for measuring the same, and an amplification method thereof.　The method for measuring pyrophosphoric acid (PPi) or phosphoribosyl pyrophosphate (PRPP) comprises the following steps (1) to (3). (1) A step for, in the presence of hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase which catalyzes the forward and reverse reactions to produce PPi from PRPP and vice versa, contacting substrate A for the forward reaction and substrate B for the reverse reaction with a sample to perform the enzymatic cycling reaction of formula (I). (2) A step for detecting the variation of a signal corresponding to at least one of the variations of substrate A, compound A' formed by the action of substrate A, substrate B, and compound B' that is a compound different from substrate A and formed by the action of substrate B. (3) A step for calculating the amount of PPi or PRPP on the basis of the variation of the signal thus detected. La présente invention concerne un procédé de mesure de l'acide pyrophosphorique ou du phosphoribosyl pyrophosphate, ce procédé atteignant une sensibilité élevée, permettant une détection avec un dispositif de manière générale et étant facile à utiliser, une composition de mesure et un kit de réactifs pour le mesurer, ainsi qu'un procédé d'amplification associé.　Le procédé de mesure de l'acide pyrophosphorique (PPi) ou du phosphoribosyl pyrophosphate (PRPP) comprend les étapes suivantes (1) à (3). (1) Une étape consistant, en présence de l'hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransférase qui catalyse les réactions avant et arrière pour produire du PPi à partir de PRPP et vice versa, à mettre en contact le substrat A pour la réaction avant et le substrat B pour la réaction arrière avec un échantillon afin d'effectuer la réaction enzymatique de cyclisation de formule (I). (2) Une étape de détection de la variation d'un signal correspondant à au moins une des variations du substrat A, du composé A' produit par l'action du substrat A, du substrat B, et du composé B' qui est un composé différent du substrat A et produit par l'action du substrat B. (3) Une étape de calcul de la quantité de PPi ou de PRPP en fonction de la variation du signal ainsi détecté. 感度が高く、汎用装置で検出ができ、操作が簡便なピロリン酸又はホスホリボシルピロリン酸の測定方法、これらを測定するための測定用組成物及び試薬キット並びにこれらの増幅方法を提供する。　下記工程（１）～（３）を含むピロリン酸(ＰＰｉ)又はホスホリボシルピロリン酸（ＰＲＰＰ）の測定方法。 （１）ＰＲＰＰからＰＰｉを生成する正反応及びその逆反応を触媒するヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼの存在下、正反応の基質Ａ及び逆反応の基質Ｂを試料に接触させて、下記式（Ｉ）の酵素サイクリング反応を行なう工程（２）基質Ａ、基質Ａが作用して生じた化合物Ａ'、基質Ｂ及び基質Ｂが作用して生じた基質Ａとは異なる化合物である化合物Ｂ'のいずれか１つ以上の変化量に対応するシグナルの変化量を検出する工程 （３）検出されたシグナルの変化量に基づき、ＰＰｉ又はＰＲＰＰの量を算出する工程