COELENTERAZINE-UTILIZING LUCIFERASES WITH STABLE GLOW-TYPE LIGHT EMISSION AND METHODS OF PRODUCING AND USING THEREOF

• Main Authors: TOUL, Martin, PLUSKAL, Daniel, MAREK, Martin, SMITH, Andrea, DAMBORSKY, Jiri, PLANASLESIAS, Joan, VASINA, Michal, BEDNAR, David, RANGEL PAMPLONA PIZARRO PINTO, Jose Gaspar, PROKOP, Zbynek
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 23.02.2023
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention includes polynucleotides that encode novel coelenterazine-utilizing luciferases as well as fragments and mutants thereof having at least 85 % sequence identity. The sequences were generated by ancestral sequence reconstruction combined with single-point mutations and transplantation of important regions from the related Renilla reniformis luciferase protein. The luciferases according to the present invention exhibit modulated properties including at least one of: increased bioluminescence emission stability and half-life; increased affinity towards substrate over the product (suppressed product inhibition); increased thermostability; increased glow-type effectivity; and modulated emission maximum. The present invention also includes polypeptides that are encoded by the provided polynucleotides as well as fragments and mutants thereof having at least 85 % sequence identity, vectors, kits and expression cassettes containing thereof, cells transfected with thereof, and methods of producing and using thereof. La présente invention comprend des polynucléotides codant pour de nouvelles luciférases utilisant la coelentérazine, ainsi que des fragments et des mutants de celles-ci ayant au moins 85 % d'identité de séquence. Les séquences ont été générées par la reconstruction de séquences ancestrales combinée à des mutations ponctuelles et à la transplantation de régions importantes de la protéine de la luciférase de Renilla reniformis apparentée. Les luciférases selon la présente invention présentent des propriétés modulées comprenant au moins l'une des caractéristiques suivantes : stabilité et demi-vie accrues de l'émission de bioluminescence ; affinité accrue envers le substrat par rapport au produit (inhibition du produit supprimée) ; thermostabilité accrue ; efficacité de type luminescent accrue ; et maximum d'émission modulé. La présente invention comprend également des polypeptides codés par les polynucléotides susmentionnés ainsi que des fragments et des mutants de ceux-ci ayant une identité de séquence d'au moins 85 %, des vecteurs, des kits et des cassettes d'expression les contenant, des cellules transfectées avec ceux-ci, et des procédés de production et d'utilisation de ceux-ci.