DOUBLE-SCREENING METHOD

• Main Authors: KUMACHI Shigefumi, NEMOTO Naoto, MURAKAMI Taihei, YONEHARA Ryo, MOTOHASHI Maiko
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 29.12.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMBINATORIAL CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES, IN SILICOLIBRARIES; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

[Problem] The purpose of the present invention is to provide a screening method equipped with a step which makes it possible to determine whether or not expression in a cell by a clone candidate, which is obtained by screening from a large-scale library before moving to a cell-based expression system, will be possible. [Solution] To provide a target molecule screening method equipped with: (a) a selection/screening step for constructing a library by selecting the DNA of a target molecule by using a non-cellular translation system, selecting the DNA of the target molecule from among the DNA fragments included in the library, and preparing a primary library by concentrating and screening the same; and (b) an expression/selection step for selecting a DNA fragment which codes a protein which can be produced in a living organism from among the proteins which can be produced from the target molecule included in the primary library obtained in the selection/screening step, and causing expression thereof using cells. La présente invention a pour but de procurer un procédé de criblage comportant une étape permettant de déterminer si l'expression dans une cellule par un candidat clone, obtenu par criblage à partir d'une banque à grande échelle avant de passer à un système d'expression à base de cellules, sera possible ou non. La solution selon l'invention porte sur un procédé de criblage de molécule cible comportant les étapes suivantes : (a) une étape de sélection/criblage pour construire une banque en sélectionnant l'ADN d'une molécule cible en utilisant un système de traduction non cellulaire, en sélectionnant l'ADN de la molécule cible parmi les fragments d'ADN inclus dans la banque, et en préparant une banque primaire par concentration et criblage de celle-ci ; et (b) une étape d'expression/sélection pour sélectionner un fragment d'ADN codant une protéine pouvant être produite dans un organisme vivant parmi les protéines pouvant être produites à partir de la molécule cible incluse dans la banque primaire obtenue dans l'étape de sélection/criblage, et provoquer son expression en utilisant des cellules. 【課題】本発明は、細胞による発現系に移行する前に上記大規模ライブラリからスクリーニングして得た候補クローンが、細胞で発現可能か否かを判別することができる工程を備えるスクリーニング方法を提供することを目的とする。 【解決手段】(a)無細胞翻訳系を使用して目的分子のDNAを選択してライブラリを構成し、前記ライブラリに含まれるDNA断片の中から、前記目的分子のDNAを選択し、濃縮して淘汰することによって一次ライブラリを作製する、選択・淘汰工程と；(b)前記選択・淘汰工程で得られた一次ライブラリに含まれる前記目的分子から作られるタンパクのうち、生物において作製可能なタンパクをコードするDNA断片を、細胞を用いて発現させて選択する発現・選択工程と；を備える、目的分子のスクリーニング方法を提供する。