GUIDE RNA HAVING MAINTAINED ON-TARGET ACTIVITY AND REDUCED OFF-TARGET ACTIVITY AND USE THEREOF

• Main Authors: LEE, Geun Ho, KIM, Ji Heon, YOO, Hyun, JUNG, Yeon Ju, SUNG, Young Hoon
• Format: Patent
• Language: English; French; Korean
• Published: 16.06.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS ORMEDICINAL PREPARATIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention relates to guide RNA having maintained on-target activity and reduced off-target activity and use thereof. Particularly, the present invention provides: guide RNA and a method for producing same, the guide RNA comprising one original mismatch in an off-target gene region, and one or two intentional mismatches in a target gene region and an off-target gene region, wherein the one or two intentional mismatches are introduced into one or both of position +10 and position +18 from the protospacer-adjacent motif of a nucleotide sequence of the guide RNA; a method for improving the accuracy of a CRISPR system by using the guide RNA; a composition for preventing, treating or diagnosing diseases, comprising guide RNA which can distinguish point mutations, which are causative of genetic diseases and cancer development, from wild-type genes and nucleotide sequences or which can distinguish CCR5, which is a target gene for acquired immunodeficiency syndrome, from a highly homologous CCR2 gene; a gene targeting method using the guide RNA; and a gene editing method. La présente invention concerne un ARN guide à activité sur cible maintenue et à activité hors cible réduite et son utilisation. Plus particulièrement, la présente invention concerne les éléments suivants : un ARN guide et un procédé pour le produire, l'ARN guide comprenant un mésappariement originel dans une région de gène hors cible, et un ou deux mésappariements intentionnels dans une région de gène cible et une région de gène hors cible, le ou les deux mésappariements intentionnels étant introduits dans l'une ou les deux positions +10 et +18 du motif adjacent au protoespaceur d'une séquence nucléotidique de l'ARN guide ; un procédé pour améliorer la précision d'un système CRISPR en utilisant l'ARN guide ; une composition pour prévenir, traiter ou diagnostiquer des maladies, comprenant un ARN guide pouvant distinguer des mutations ponctuelles, responsables de maladies génétiques et du développement de cancers, de gènes et de séquences nucléotidiques de type sauvage ou pouvant distinguer CCR5, étant un gène cible du syndrome d'immunodéficience acquise, d'un gène CCR2 hautement homologue ; un procédé de ciblage de gènes utilisant l'ARN guide ; et un procédé d'édition de gènes. 본 발명은 온-타겟 활성이 유지되고 오프-타겟 활성이 감소된 가이드 RNA 및 이의 용도에 관한 것으로, 구체적으로, 오프-타겟 유전자 영역에 대해 원래 (original) 하나의 미스매치를 포함하고, 타겟 유전자 영역 및 오프-타겟 유전자 영역에 대해 의도적인 (intentional) 하나 또는 두 개의 미스매치를 포함하되, 이때, 의도적인 하나 또는 두 개의 미스매치는 가이드 RNA의 뉴클레오타이드 서열의 프로토스페이서-인접 모티프 (protospacer-adjacent motif)로부터 +10 위치 및 +18 위치 중 하나 또는 두 개에 도입되는 가이드 RNA 및 이의 제조방법, 상기 가이드 RNA를 이용한 CRISPR 시스템의 정확도를 향상시키는 방법, 유전질환 및 암 발생의 원인이 되는 점 돌연변이(point mutation)를 야생형 유전자 및 염기서열로부터 구분하거나 후천성면역결핍증의 타겟 유전자인 CCR5를 고도의 상동성 CCR2 유전자로부터 구분할 수 있는 가이드 RNA를 포함하여 질병을 예방, 치료 또는 진단하기 위한 조성물, 상기 가이드 RNA를 이용한 유전자 표적 방법 및 유전자 교정 방법을 제공한다.