ENZYME VARIANTS

• Main Authors: FLEISHMAN, Sarel-Jacob, KHERSONSKY, Olga, RACKHAM, Oliver, FILIPOVSKA, Aleksandra, VOS, Pascal
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 16.06.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Provided herein are Cas9 proteins comprising SEQ ID NO:1 or a sequence at least 80% identical thereto, wherein: the amino acid residues at positions 765 to 780 are replaced by the amino acid sequence of SEQ ID NO:5 or SEQ ID NO:6; the amino acid residues at positions 838 to 853 are replaced by the amino acid sequence of SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 or SEQ ID NO:10; and/or the amino acid residues at positions 911 to 925 are replaced by the amino acid sequence of SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 or SEQ ID NO:13. Also provided are Cas9 proteins comprising an HNH domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:14 or a sequence at least 80% identical thereto, wherein: the amino acid residues at positions 1 to 16 are replaced by the amino acid sequence of SEQ ID NO:5 or SEQ ID NO:6; the amino acid residues at positions 74 to 89 are replaced by the amino acid sequence of SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 or SEQ ID NO:10; and/or the amino acid residues at positions 147 to 161 are replaced by the amino acid sequence of SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 or SEQ ID NO:13. La présente invention concerne des protéines Cas9 comprenant la SEQ ID NO :1 ou une séquence identique à celle-ci à au moins 80 %, et où : les résidus d'acides aminés aux positions 765 à 780 sont remplacés par la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 5 ou de la SEQ ID NO : 6 ; les résidus d'acides aminés aux positions 838 à 853 sont remplacés par la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 7, la SEQ ID NO : 8, la SEQ ID NO : 9 ou la SEQ ID NO : 10 ; et/ou les résidus d'acides aminés aux positions 911 à 925 sont remplacés par la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 11, la SEQ ID NO : 12 ou la SEQ ID NO : 13. La présente invention concerne également des protéines Cas9 comprenant un domaine HNH comprenant la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 14 ou une séquence identique à au moins 80 % de celle-ci, et où : les résidus d'acides aminés aux positions 1 à 16 sont remplacés par la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 5 ou de la SEQ ID NO : 6 ; les résidus d'acides aminés aux positions 74 à 89 sont remplacés par la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 7, la SEQ ID NO : 8, la SEQ ID NO : 9 ou la SEQ ID NO : 10 ; et/ou les résidus d'acides aminés aux positions 147 à 161 sont remplacés par la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO : 11, la SEQ ID NO : 12 ou la SEQ ID NO : 13.