METHOD FOR DETECTING GENETIC POLYMORPHISM

• Main Authors: KAWAKAMI Daisuke, IHARA Masafumi
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 21.04.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention mainly addresses the problem of providing a novel method for detecting an ApoEgenetic polymorphism rapidly with low invasiveness for a subject. The present invention includes, for example, a method for detecting a genetic polymorphism in apolipoprotein E occurring in genomic DNA collected from a subject, the method comprising the following steps 1 to 3. 1. A step for producing a specimen containing DNA in a free form from saliva. 2. A step for adding (1) a PCR enzyme, (2) a PCR primer pair for amplifying a nucleic acid fragment of apolipoprotein E gene and (3) a fluorescent label probe set having an oligonucleotide for detecting a genetic polymorphism in apolipoprotein E to the specimen containing the DNA, and agitating the resultant mixture. 3. A step for performing PCR to produce a PCR product, and measuring a fluorescence intensity corresponding to the genetic polymorphism in apolipoprotein E from the PCR product. La présente invention a pour principal objectif de procurer un nouveau procédé permettant de détecter rapidement un polymorphisme ApoEgenetique avec une faible invasivité pour un sujet. La présente invention comprend, par exemple, un procédé de détection d'un polymorphisme génétique de l'apolipoprotéine E survenant dans l'ADN génomique prélevé sur un sujet, le procédé comprenant les étapes 1 à 3 suivantes : 1. production d'un spécimen contenant de l'ADN sous une forme libre à partir de la salive ; 2. ajout (1) d'une enzyme PCR, (2) d'une paire d'amorces PCR pour amplifier un fragment d'acide nucléique du gène de l'apolipoprotéine E et (3) d'un ensemble de sondes à marquage fluorescent comportant un oligonucléotide pour détecter un polymorphisme génétique dans l'apolipoprotéine E au prélèvement contenant l'ADN, et agitation du mélange résultant ; 3. réalisation d'une PCR pour produire un produit de PCR, et mesure d'une intensité de fluorescence correspondant au polymorphisme génétique de l'apolipoprotéine E à partir du produit de PCR. 本発明は、迅速かつ被験者への侵襲性が低い、ＡｐｏＥ遺伝子多型の新たな検出方法を提供することを主な課題とする。 本発明として、例えば、被験者から採取されたゲノムＤＮＡに存在するアポリポ蛋白Ｅの遺伝子多型を検出するための方法であって、次の１～３のステップを含む遺伝子多型検出方法を挙げることができる。 １．唾液からＤＮＡを遊離した検体を作製するステップ、 ２．当該ＤＮＡを含む検体に、（１）ＰＣＲ酵素、（２）アポリポ蛋白Ｅ遺伝子の核酸断片を増幅するためのＰＣＲプライマー対、ならびに（３）アポリポ蛋白Ｅの遺伝子多型を検出するためのオリゴヌクレオチドを有する蛍光標識プローブセットを添加し混合するステップ、 ３．ＰＣＲを行い、そのＰＣＲ産物からアポリポ蛋白Ｅの遺伝子多型に応じた蛍光強度を測定するステップ。