IMPROVED METHOD FOR DETECTING VIRUS

• Main Authors: TERAUCHI Kenta, YAMAKOSHI Nana, OKAYAMA Tadashi
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 03.02.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present invention provides a method and a kit for making it possible to detect the presence/absence of virus RNA by one-step RT-PCR, in which the RNA is not isolated from a specimen, and a sample that has been subjected to only a simple thermal pre-treatment is added to a reaction solution. In particular, provided is a means for detecting, at a high sensitivity, the presence of a coronavirus in a specimen. A method for testing the presence of an RNA virus according to one embodiment of the present invention comprises steps (1) to (4): (1) a step for preparing a liquid mixture that contains a specimen which has not been subjected to RNA purification, an anionic polymer, and a polar organic solvent; (2) a step for heating the liquid mixture; (3) a step for adding, to the liquid mixture which has been heated, a 1-step RT-PCR reaction solution that includes (i) a reverse transcriptase and a DNA polymerase or (ii) a DNA polymerase having reverse transcription activity; and (4) a step for performing 1-step RT-PCR reaction after tightly sealing the reaction container. L'invention concerne un procédé permettant de détecter, à l'aide d'une RT-PCR en une seule étape, la présence ou l'absence d'ARN viral, sans isoler l'ARN d'un échantillon, par ajout à un liquide de réaction d'un échantillon ayant été soumis uniquement à un simple pré-traitement thermique. L'invention concerne également un kit associé. Plus spécifiquement, l'invention concerne un moyen de détecter avec une grande sensibilité la présence d'un coronavirus dans un échantillon. Dans un mode de réalisation, l'invention permet de vérifier la présence d'un virus à ARN et comporte les étapes (1) à(4) suivantes: (1) étape au cours de laquelle un mélange liquide contenant un échantillon dont l'ARN n'a pas été purifié, un polymère anionique et un solvant organique polaire est purifié; (2) une étape au cours de laquelle le mélange liquide obtenu est chauffé; (3) une étape au cours de laquelle un liquide de réaction RT-PCR en une seule étape contenant (i) une transcriptase inverse et une ADN polymérase ou (ii) une ADN polymérase possédant une activité de transcription inverse, est ajouté au mélange liquide après chauffage; et (4) une étape au cours de laquelle, après fermeture hermétique d'un contenant de réaction, la réaction RT-PCR en une étape est effectuée. 本発明は、試料からＲＮＡの単離を行うことなく、熱処理による簡便な前処理のみおこなったサンプルを反応液に加え、１ステップＲＴ－ＰＣＲによりウイルスのＲＮＡの有無の検出を可能とする方法およびキットを提供する。特に試料中のコロナウイルスの存在を高感度に検出する手段を提供する。一実施形態において、本発明は、以下の（１）から（４）の工程を包含する、ＲＮＡウイルスの存在を検査する方法である：（１）ＲＮＡの精製を行っていない試料と、アニオン性ポリマーと、極性有機溶媒とを含む混合液を調製する工程、（２）前記混合液を加熱する工程、（３）加熱後の前記混合液に、（ｉ）逆転写酵素およびＤＮＡポリメラーゼまたは（ｉｉ）逆転写活性を有するＤＮＡポリメラーゼを含む１ステップＲＴ－ＰＣＲ反応液を添加する工程、（４）反応容器を密閉後、1ステップＲＴ－ＰＣＲ反応を実施する工程。