SELECTION BY ESSENTIAL-GENE KNOCK-IN

• Main Authors: TOMISHIMA, Mark James, MARGULIES, Carrie Marie, ZURIS, John Anthony, SOH, Chew-Li, MCAULIFFE, Conor Brian, MONETTI, Claudio, TONGE, Peter
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 02.12.2021
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Strategies, systems, compositions, and methods for efficient production of knock-in cellular clones without reporter genes. An essential gene is targeted using a knock-in cassette that comprises an exogenous coding sequence for a gene product of interest (or "cargo sequence") in frame with and downstream (3') of an exogenous coding sequence or partial coding sequence of the essential gene. Undesired targeting events create a non-functional version of the essential gene, in essence a knock-out, which is "rescued" by correct integration of the knock-in cassette, which restores the essential gene coding region so that a functional gene product is produced and positions the cargo sequence in frame with and downstream of the essential gene coding sequence. L'invention concerne des stratégies, des systèmes, des compositions et des procédés pour une production efficace de clones cellulaires knock-in sans gènes rapporteurs. Un gène essentiel est ciblé à l'aide d'une cassette knock-in qui comprend une séquence de codage exogène pour un produit génique d'intérêt (ou « séquence cargo ») en phase avec une séquence de codage exogène ou une séquence de codage partielle du gène essentiel et en aval (3') de celle-ci. Des événements de ciblage non souhaités créent une version non fonctionnelle du gène essentiel, en somme un knock-out, qui est « sauvé » par une intégration correcte de la cassette knock-in, qui restaure la région de codage du gène essentiel de telle sorte qu'un produit génique fonctionnel soit produit, et positionne la séquence cargo en phase avec la séquence de codage du gène essentiel et en aval de celle-ci.