METHODS FOR USING MASS SPECTROSCOPY IN MULTIPLEX TARGET EVALUATIONS

• Main Authors: LAPARRE, Jérôme, RAMNATH, Manilduth, FOUCHAQ, Benoît
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 18.03.2021
• Subjects: CHEMISTRY; COMBINATORIAL CHEMISTRY; INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES, IN SILICOLIBRARIES; MEASURING; METALLURGY; PHYSICS; TESTING

Provided are multiplexed methods for characterizing binding of a test compound to different receptor target molecules using mass spectroscopy techniques. The methods employ receptor molecules that have different functions or found in different tissues, such as cerebral cortex, cerebellum, ventricular and hepatic membrane preparations. The methods enable determination of undesirable off-target binding of a test compound. The methods comprise incubation of a heterologous mixture of different receptor target molecules with ligands (known binders), and a test compound. Various wells contain different amounts of molecules for use in construction of concentration curves. Next, unbound ligands are separated from the well contents. Next, ligands that were bound to the receptors are separated. An LC/ESI-MS/MS method may be used to reduce irrelevant mass spectroscopy peaks. Binding of the test compound to a desired receptor target molecule is compared to binding of the test compound to other receptor target molecules, i.e., off-target binding. L'invention concerne des procédés multiplexés permettant de caractériser la liaison d'un composé de test à différentes molécules cibles réceptrices à l'aide de techniques de spectroscopie de masse. Les procédés utilisent des molécules réceptrices qui ont des fonctions différentes ou trouvées dans différents tissus, tels que le cortex cérébral, le cervelet, les préparations de membrane ventriculaire et hépatique. Les procédés permettent de déterminer la liaison hors cible indésirable d'un composé de test. Les procédés comprennent l'incubation d'un mélange hétérologue de différentes molécules cibles réceptrices avec des ligands (liants connus), et un composé de test. Divers puits contiennent différentes quantités de molécules pour une utilisation dans la construction de courbes de concentration. Ensuite, des ligands non liés sont séparés des contenus des puits. Puis, des ligands qui ont été liés aux récepteurs sont séparés. Un procédé LC/ESI-MS/MS peut être utilisé pour réduire des pics de spectroscopie de masse non pertinents. La liaison du composé de test à une molécule cible réceptrice souhaitée est comparée à la liaison du composé de test à d'autres molécules cibles réceptrices, c'est-à-dire, la liaison hors cible.