METHODS FOR INTEGRATING A DONOR DNA SEQUENCE INTO THE GENOME OF BACILLUS USING LINEAR RECOMBINANT DNA CONSTRUCTS AND COMPOSITIONS THEREOF

• Main Authors: FRISCH, Ryan L, STUBBS, Stacey Irene Robida, SUH, Wonchul, ZIMMER, Derek Joseph
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 08.10.2020
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES USING MICROORGANISMS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Methods and compositions are provided for integrating donor DNA sequences into the genome of a Bacillus sp. cell without the integration of a selectable marker into said genome. The methods employ a linear recombinant DNA construct comprising a donor DNA flanked by long homology arms (each of at least 1000 nucleotides in length) in combination with a recombinant DNA construct encoding a Cas9 endonuclease and a guide RNA, for the introduction of a guide RNA/Cas endonuclease into a Bacillus sp. cell, and as such providing a highly effective system for integrating donor DNA sequences into the genome of said Bacillus sp. cell, without the need to integrate a selectable marker in the genome of said Bacillus sp. cell. L'invention concerne des procédés et des compositions pour intégrer des séquences d'ADN donneur dans le génome d'une cellule d'un Bacillus sp. sans l'intégration d'un marqueur sélectionnable dans ledit génome. Les procédés utilisent une construction d'ADN recombinant linéaire comprenant un ADN donneur flanqué de bras à grande homologie (chacun d'une longueur d'au moins 1000 nucléotides) en combinaison avec une construction d'ADN recombinant codant pour une endonucléase Cas9 et un ARN guide, pour l'introduction d'un ARN de guidage/endonucléase Cas dans une cellule de Bacillus sp. et en tant que telle, fournit un système hautement efficace pour intégrer des séquences d'ADN donneur dans le génome de ladite cellule de Bacillus sp., sans avoir besoin d'intégrer un marqueur sélectionnable dans le génome de ladite cellule de Bacillus sp..