METHOD FOR QUANTIFYING TARGET NUCLEIC ACIDS

• Main Authors: TOGAWA Naoyuki, MOMOSE Kazuki, SATOU Eiji, HARA Ai
• Format: Patent
• Language: English; French; Japanese
• Published: 28.11.2019
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The purpose of the present invention is to provide a simple means whereby the absolute quantities of two or more kinds of target nucleic acids in a sample can be simultaneously determined. Provided is a method for determining the absolute quantities of two or more kinds of target nucleic acids in a sample, said method comprising: (a) a step for mixing the sample with a known quantity of a control nucleic acid; (b) a step for co-amplifying all of the target nucleic acids in the sample, specific nucleic acids that are collectively amplified with the target nucleic acids and the control nucleic acid; (c) a step for determining the total quantity of all of the target nucleic acids in the sample and the specific nucleic acids using, each as an indication, the total quantity of all of the target nucleic acids and the specific nucleic acids having been amplified and the quantity of the control nucleic acid having been amplified; and (d) a step for calculating the absolute quantities of the individual target nucleic acids in the sample depending on the occupancies of the individual target nucleic acids relative to the sum of all of the target nucleic acids and the specific nucleic acids, said occupancies being calculated using, each as an indication, the total quantity of all of the target nucleic acids and the specific nucleic acids having been amplified and the quantity of the target nucleic acids having been amplified. La présente invention vise à fournir un moyen simple grâce auquel les quantités absolues d'au moins deux types d'acides nucléiques cibles dans un échantillon peuvent être déterminées simultanément. L'invention concerne un procédé de détermination des quantités absolues d'au moins deux types d'acides nucléiques cibles dans un échantillon, ledit procédé comprenant : (a) une étape de mélange de l'échantillon avec une quantité connue d'un acide nucléique témoin ; (b) une étape de co-amplification de tous les acides nucléiques cibles dans l'échantillon, les acides nucléiques spécifiques qui sont collectivement amplifiés avec les acides nucléiques cibles et l'acide nucléique témoin ; (c) une étape de détermination de la quantité totale de tous les acides nucléiques cibles dans l'échantillon et les acides nucléiques spécifiques à l'aide, chacune en tant qu'indication, de la quantité totale de tous les acides nucléiques cibles et les acides nucléiques spécifiques ayant été amplifiés et la quantité de l'acide nucléique témoin ayant été amplifié ; et (d) une étape consistant à calculer les quantités absolues des acides nucléiques cibles individuels dans l'échantillon en fonction des occupations des acides nucléiques cibles individuels par rapport à la somme de tous les acides nucléiques cibles et des acides nucléiques spécifiques, lesdites occupations étant calculées à l'aide, chacune en tant qu'indication, de la quantité totale de tous les acides nucléiques cibles et des acides nucléiques spécifiques ayant été amplifiés et de la quantité des acides nucléiques cibles ayant été amplifiés. 本発明は、試料中の2種以上の標的核酸の絶対量を同時に決定することができる簡便な手段の提供を目的とする。　本発明者らは、試料中の2種以上の標的核酸の絶対量を決定する方法であって、（a）試料と既知量のコントロール核酸とを混合する工程、（b）試料中の全ての標的核酸および標的核酸と一括して増幅される特定の核酸群並びにコントロール核酸を共増幅する工程、（c）増幅された全ての標的核酸および前記特定の核酸群の合計の量の指標並びに増幅されたコントロール核酸の量の指標から、試料中の全ての標的核酸および前記特定の核酸群の合計の量を決定する工程、並びに、（d）増幅された全ての標的核酸および前記特定の核酸群の合計の量の指標と増幅された標的核酸の量の指標とから算出される、全ての標的核酸および前記特定の核酸群の合計中の各標的核酸の占有率から、試料中の各標的核酸の絶対量を算出する工程、を含む、前記方法を提供する。